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文檔簡介
1、豬干擾素-γ(PoIFN-γ)是由激活的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生的一類細(xì)胞因子，它具有高效抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用，有廣闊的應(yīng)用前景。為了更好地利用基因工程技術(shù)來開發(fā)重組豬干擾素-γ制劑，本研究將去除信號肽的豬干擾素-γcDNA基因置于釀酒酵母α因子分泌信號的DNA序列后，構(gòu)建成能精確分泌表達PoIFN-γ蛋白的重組表達載體pPIC9K-α-PoIFN-γ，通過電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入畢赤酵母GS115中，采用G418進行篩選，獲得了兩株能夠高效分泌表達Po
2、IFN-γ的多拷貝插入重組子。提取重組子的基因組DNA，采用PCR方法對重組子進行鑒定，結(jié)果表明PoIFN-γ成熟多肽基因成功整合到宿主菌的基因組中。重組子經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達96h后，離心培養(yǎng)物，取上清用75％硫酸銨4℃沉淀過夜，再用PBS(pH7.4)透析24h，然后進行SDS-PAGE和Westernblot分析，結(jié)果表明所獲得的兩株重組子都能分泌表達出17kD和23kD左右的PoIFN-γ特異蛋白，表達量分別為105mg/L和108m
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