柯薩奇病毒感染心肌細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)各種酶及病毒滴度的變化情況.pdf

1、目的:柯薩奇病毒的B組(CVB)是侵犯人類心肌引起病毒性心肌炎的首位病原體，其中尤其3型(CVB3)最常見(jiàn)。病毒性心肌炎是兒科常見(jiàn)傳染病，在成人呈散發(fā)。感染后可出現(xiàn)發(fā)熱，發(fā)病后可引起突然的、急性心力衰竭，死亡率高。病毒性心肌炎可發(fā)展為擴(kuò)張性心肌病。CVB3導(dǎo)致病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制尚末完全搞清，現(xiàn)認(rèn)為可能主要由病毒直接作用和病毒感染后引起機(jī)體高免疫炎癥性反應(yīng)所致。對(duì)于病毒性心肌炎，目前臨床缺乏有效的預(yù)防手段與特異的治療藥物。對(duì)CVB3感

2、染的過(guò)程和機(jī)體變化情況的研究，尤其是對(duì)CVB3感染后心肌細(xì)胞的變化情況的進(jìn)行深入研究，探計(jì)病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制及發(fā)展過(guò)程，有可能為臨床病毒性心肌炎的治療提供依據(jù)。
　　方法:
　　1、C57BL/6小鼠心肌細(xì)胞體外培養(yǎng):無(wú)菌取C57BL/6小鼠心臟，剪碎，經(jīng)胰酶及膠原酶消化后收集細(xì)胞，接種至6孔板中放入CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。小鼠抗B-actin抗體，小鼠抗vimertin抗體，小鼠IgG-免疫組化染色進(jìn)行心肌細(xì)胞鑒定。

3、>　　2、小鼠心肌細(xì)胞感染柯薩奇病毒，心肌細(xì)胞培養(yǎng)至80％融合時(shí)，接種柯薩奇病毒，觀察細(xì)胞病變情況，并分別于感染后第1天，第2天，第3天，第4天，第6天，第8天，第10天收集細(xì)胞上清液，-30 C保存?zhèn)溆谩?br>　　3、收集到的細(xì)胞上清液分別測(cè)定肌鈣蛋白(cTnI)，超敏C反應(yīng)蛋白（CRP），肌酸激酶(CK)，乳酸脫氫酶(LDH)，肌酸激酶同工酶(CK-MB)，α羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)，肌紅蛋白(MYO)，同型半胱氨酸(HCY)

4、的含量。
　　4、收集到的細(xì)胞上清液分別用Hela細(xì)胞測(cè)病毒滴度。
　　結(jié)果:
　　1、體外培養(yǎng)小鼠心肌細(xì)胞生長(zhǎng)良好，部分細(xì)胞有明顯搏動(dòng)，免疫組化染色，B-actin抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)，vimertin抗體染色呈陰性反應(yīng)符合心肌細(xì)胞染色特征。
　　2、取柯薩奇病毒感染小鼠心肌細(xì)胞后不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞上清液，測(cè)定心肌酶類，結(jié)果可見(jiàn)第三天達(dá)到峰值，前3天呈上升趨勢(shì)隨后上升幅度不明顯，并逐漸趨于平緩。
　　3、柯薩奇病

5、毒感染小鼠心肌細(xì)胞后，細(xì)胞病變不明顯，取不同時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞上清液，感染Hela細(xì)胞，測(cè)定到病毒滴度，前3天有病毒產(chǎn)生，但滴度呈逐漸下降趨勢(shì)，在第10天TCID50水平為0，提示心肌細(xì)胞不是柯薩奇病毒的主要敏感細(xì)胞，病毒直接損傷可能不是其主要致病機(jī)制。
　　結(jié)論:CVB3是人類病毒性心肌炎的主要病原體。CVB3早期可對(duì)部分心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)造成破壞，引起部分細(xì)胞內(nèi)酶類釋放并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但CVB3在心肌細(xì)胞內(nèi)不增殖。隨后細(xì)胞的直接損傷情況不