硫胺素、葉酸對柯薩奇B-,3-病毒感染的心肌細胞保護作用的研究.pdf

1、目的:
　　 在細胞水平上探討硫胺素、葉酸及其合劑對柯薩奇B3(CVB3)病毒感染的心肌細胞是否具有保護作用。
　　 方法:
　　 1.用胰酶-差速貼壁法后，將心肌細胞分為兩組進行體外培養(yǎng)，其中一組細胞加入抑制劑5-溴脫氧尿苷(5-BrdU)作為對照。每天觀察記錄兩組心肌細胞的大小、形態(tài)和搏動頻率，計算1、3、5、7天心肌細胞的陽性率，并用MTT法繪制心肌細胞體外生長曲線。兩組心肌細胞的搏動頻率比較用t檢驗與單因

2、素方差分析，心肌細胞α-橫紋肌肌動蛋白(α-SA)抗體陽性率的比較采用x2檢驗。
　　 2.明確心肌細胞的最佳干預(yù)時間后，用柯薩奇B3(CVB3)病毒致心肌細胞損傷，使用最大無毒劑量(TC0)的硫胺素、葉酸及其合劑，分別用4類方式處理心肌細胞，即藥物在病毒前(Ⅰ)、后(Ⅱ)加及藥物與病毒同時(Ⅲ)、在藥物與病毒作用后(Ⅳ)加入，待CVB3感染的心肌細胞病變程度達“++++”時，采用MTT比色法測定心肌細胞OD值，并結(jié)合心肌細胞病

3、變程度(CPE)、搏動頻率及心肌酶等多項指標，觀察兩種維生素及其合劑對心肌細胞的保護作用。配伍組比較用單因素方差分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.使用濃度為0.08％的胰酶可成功培養(yǎng)乳鼠心肌細胞，5-BrdU組和非抑制劑組的細胞在形態(tài)學(xué)及搏動性上差異不大。72h后心肌細胞同步性搏抑制劑組的細胞在形態(tài)學(xué)及搏動性上差異不大。72h后心肌細胞同步性搏動。經(jīng)α-橫紋肌肌動蛋白(α-SA)鑒定，除第1天外，第3、5、7天抑制劑組的心

4、肌細胞陽性率均高于非抑制組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在1-7天培養(yǎng)期間，第3天為指數(shù)生長期的中期，細胞生長最旺盛，在第4天后，細胞生長緩慢進入平臺期，細胞增殖速度明顯降低。
　　 2.硫胺素、葉酸及其合劑按照四種方式處理后發(fā)現(xiàn)，在Ⅰ、Ⅱ種方式中，藥物組OD值與病毒對照組OD值比較差異有顯著性(P＜0.05)，在Ⅲ、Ⅳ類作用方式中，藥物組OD值與病毒對照組OD值比較差異無顯著性(P＞0.05)。藥物組心肌細胞搏動頻率較病

5、毒組心肌細胞搏動頻率高，有顯著差異(P＜0.05)，CPE減輕，心肌酶顯著降低(P＜0.05)，但藥物組與正常組比較仍較高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.使用胰酶消化-差速貼壁以及5-Brdu法進行乳鼠心肌細胞的培養(yǎng)，單細胞收獲率高，細胞存活率高，心肌細胞和非心肌細胞分離較徹底，心肌細胞純度較高，此方法建立的心肌細胞體外模型可以滿足后繼干預(yù)實驗的要求。心肌細胞培養(yǎng)的第3天，即72h時點，是對心肌細胞進行干預(yù)并