口蹄疫病毒感染PK-15細(xì)胞后細(xì)胞基因表達(dá)譜變化的分析.pdf

1、為了能夠有效地防控FMD,研究該病的致病機(jī)理及機(jī)體如何抵抗病毒的復(fù)制顯得尤為重要?？谔阋卟《臼且环N胞殺的小RNA病毒,感染宿主細(xì)胞后,可以引起宿主細(xì)胞機(jī)制發(fā)生重要變化。為了研究FMDV感染宿主細(xì)胞后基因表達(dá)的變化,我們利用熒光定量PCR方法檢測了FMDV在細(xì)胞內(nèi)的增殖情況及首次用豬IVT基因表達(dá)譜芯片上的23937個探針測定了O型FMDV感染PK-15細(xì)胞1h、2h和4h后宿主mRNA表達(dá)水平的變化。研究結(jié)果表明,在病毒感染細(xì)胞的不同時

2、間段中共有656個基因發(fā)生變化,其中上調(diào)基因有429個,下調(diào)基因有227個。這些基因的功能涉及到細(xì)胞信號傳遞、免疫、代謝、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞骨架與蛋白質(zhì)合成等方面。研究結(jié)果還表明,一些與先天性免疫信號早期激活相關(guān)的基因如細(xì)胞內(nèi)分子伴侶Hsp90在病毒早期感染過程中表達(dá)水平有明顯上調(diào)。為了進(jìn)一步研究FMDV感染對機(jī)體先天性免疫信號通路中的關(guān)鍵分子的影響。將具有不同功能的RIG-I基因的N端和C端分別克隆到pEGFP-N1表達(dá)載體(分

3、別命名為pEGFP-RIG-N和pEGFP-RIG-C),研究了FMDV感染RIG-N或RIG-C基因過表達(dá)的PK-15細(xì)胞中的病毒增殖情況和IFN水平變化。發(fā)現(xiàn)RIG-N激發(fā)了信號通路中下游IFN的表達(dá),能夠抑制FMDV增殖；而RIG-C對IFN的水平變化沒有影響,也不能抑制FMDV增殖,表明RIG-N基因的過表達(dá)具有抗FMDV增殖的作用。這些結(jié)果為進(jìn)一步研究FMDV的致病機(jī)理,豐富小RNA病毒感染激活細(xì)胞先天性免疫信號通路的研究奠定