口蹄疫病毒VP2蛋白B細胞線性表位的鑒定.pdf

1、口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。易感動物如黃牛、綿羊、山羊和豬等?？谔阋弑皇澜鐒游镄l(wèi)生組織列為必須通報的動物傳染病。對口蹄疫的預(yù)防和診斷，需要建立在對病毒蛋白抗原結(jié)構(gòu)與功能的研究之上。本研究首先利用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達了Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白，抗原性檢測結(jié)果表明表達產(chǎn)物能被Asia1型口蹄疫感染血清所識別。
　　 為了分析Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的優(yōu)勢抗原表位區(qū)，設(shè)計了7個覆

2、蓋整個Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的多肽片段，分別進行融合表達，經(jīng)Western blot分析表明只有融合蛋白TrxA-F1（1~44aa）能夠被Asia1型口蹄疫感染血清所識別，鑒定表明1~44aa為Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細胞線性抗原表位區(qū)。本實驗同時證實，O型、A型、C型口蹄疫標準血清和感染SAT2型口蹄疫康復(fù)期的牛血清也能識別表達的融合蛋白TrxA-F1。為了進一步鑒定Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細胞線性

3、線性抗原表位區(qū)，設(shè)計了6個覆蓋F1（1~44aa）的多肽片段，每一個多肽片段合成一對寡核酸片段，經(jīng)磷酸化、退火后插入表達載體pET-32a進行融合表達，表達的6個融合蛋白經(jīng)切膠的方法進行純化。經(jīng)Western-Blot進一步鑒定出了Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細胞線性抗原表位區(qū)位于N末端的6~15aa區(qū)域。
　　 在鑒定Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白的基礎(chǔ)上，對Asia1型和O型口蹄疫病毒VP2進行氨基酸序列的比對，結(jié)

4、果表明在兩者N末端的1~31氨基酸序列完全一致。所以，可以只針對O型口蹄疫病毒VP2蛋白32~218 aa進行B細胞抗原表位的鑒定，設(shè)計了3個相互重疊的多肽片段覆蓋O型口蹄疫病毒VP2蛋白32~218 aa區(qū)域。經(jīng)克隆表達，Western blot鑒定在此區(qū)域未鑒定出B細胞線性抗原表位。
　　 綜合上述實驗結(jié)果，Asia1型和O型口蹄疫病毒VP2蛋白的B細胞線性抗原表位區(qū)N末端的6~15aa區(qū)域，而此區(qū)域也是其它血清型口蹄疫病毒