流產(chǎn)布魯氏菌BP26蛋白B細(xì)胞線性表位的鑒定.pdf

1、布魯氏菌病(Brucellosis)是由布魯氏菌(Brucella)引起的傳染性疾病，給畜牧業(yè)的發(fā)展造成巨大的的經(jīng)濟(jì)損失。該菌能經(jīng)過皮膚粘膜和呼吸道等途徑侵入機(jī)體引起感染和發(fā)病。布魯氏菌病的易感動物種類很多，其中羊、牛、豬最易感。BP26具有良好的抗原性，是由細(xì)胞內(nèi)向外釋放的可溶性外周蛋白，相對于固定的外膜蛋白，具有易于檢測的的特點(diǎn)。BP26在各布魯氏菌種中的相似性較高，所以適合做布魯氏菌病的診斷抗原。
　　 為了對流產(chǎn)布魯氏菌

2、BP26蛋白進(jìn)行抗原表位研究，設(shè)計了3個相互重疊15個氨基酸、覆蓋整個BP26蛋白的重疊短肽，經(jīng)克隆并在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了融合表達(dá)。用流產(chǎn)型布魯氏菌感染的陽性血清對3個融合蛋白進(jìn)行免疫印跡分析，初步鑒定出BP26蛋白B細(xì)胞線性抗原表位位于第51～165aa處。根據(jù)上述結(jié)果，針對BP262(51～165aa)短肽，將其分為5個相互重疊10個氨基酸的短肽片段，進(jìn)一步鑒定出了BP26蛋白B細(xì)胞線性表位位于第109～141aa氨基酸區(qū)域。此基礎(chǔ)上

3、，又進(jìn)行了第三輪的抗原表位篩選，針對BP262.4(109～141aa)短肽設(shè)計了6個相互重疊5個氨基酸的短肽片段，經(jīng)磷酸化退火后與表達(dá)載體pET-32a進(jìn)行融合表達(dá)及純化，通過Western-blot鑒定具有抗原性的片段為第118～132aa處。最后，為了進(jìn)一步縮短BP26蛋白的B細(xì)胞線性表位，進(jìn)行了第四輪的篩選，針對BP262.4.3(118～127aa)和BP262.4.4(123～132aa)短肽設(shè)計了9個氨基酸的短肽片段，經(jīng)磷