咖啡酸聯(lián)合富氫鹽水救治骨髓型急性放射病的實驗研究.pdf

1、目的：
　　應用咖啡酸(Caffeic acid，CFA)聯(lián)合富氫鹽水救治骨髓型急性放射病(acuteradiation disease，ARD)小鼠，觀測其對輻射小鼠骨髓造血恢復的影響，探討CFA與富氫鹽水救治骨髓型ARD的作用機制，為臨床防治骨髓型ARD探索一條新途徑。
　　方法：
　　本研究模擬電離輻射環(huán)境構建骨髓型ARD小鼠模型。研究分三部分。第一部分:咖啡酸救治骨髓型ARD的作用研究。將180只SPF級近交系

2、BALB/c小鼠雌雄各半隨機分為9組，每組20只:Sham組（不照射，不灌藥）、CFA陰性對照組（照射后羥甲基纖維素灌胃）、CFA陽性對照組（照射后G-CSF+IL-11腹腔注射），CFA預防組（照射+照前7天開始將咖啡酸按照低、中、高劑量灌胃，即CFA低劑量預防組、CFA中劑量預防組、CFA高劑量預防組），CFA治療組（照射+照后當天開始將咖啡酸按照低、中、高劑量灌胃，即CFA低劑量治療組、CFA中劑量治療組、CFA高劑量治療組）。第

3、二部分:富氫鹽水救治骨髓犁ARD的作用研究。隨機將80只SPF級近交系BALB/c小鼠雌雄各半隨機分為4組，每組20只:富氫鹽水Sham組（不照射，只腹腔注射生理鹽水）、富氫鹽水陰性對照組（照射+腹腔注射生理鹽水），富氫鹽水預防組（照射+照前7天開始腹腔注射富氫鹽水），富氫鹽水治療組（照射+照后當天腹腔注射富氫鹽水）。第三部分:CFA聯(lián)合富氫鹽水救治骨髓型ARD的作用研究。從第一部分擇優(yōu)取CFA高劑量預防組、第二部分中擇優(yōu)取富氫鹽水預防

4、組及二者聯(lián)用組成聯(lián)合組，每組20只，共60只。每周測定小鼠體重，每組取12只分別于照后d4、d14各處死6只，摘眼球取血測定造血正性調(diào)控因子G-CSF、TPO、IL-1β和造血負性調(diào)控因子TNF-α的水平及氧化損傷標志物:MDA含量與SOD活性，以及DNA損傷標志物:8-OHdG含量;d14取左側(cè)股骨測定骨髓有核細胞計數(shù)(Bone Marrow Nucleated Cells，BMNC)計數(shù)并行粒系和巨噬系集落形成單位(colony f

5、orming unit of Granulocyte andMacrophage，CFU-GM)及巨核細胞形成單位(colony forming unit of Megakaryocyte，CFU-MK)體外培養(yǎng)并計數(shù);摘取脾臟稱重測定脾臟指數(shù)(Spleen Index，SI)及脾結(jié)節(jié)克隆集落形成單位(Colony Formation Units of Spleen，CFU-S)計數(shù)。各組剩余小鼠分別于照射當天d0、照后d4、d7、d1

6、4、d21、d28眼球后靜脈叢取血測定外周血WBC、HGB、PLT計數(shù)。
　　結(jié)果：
　　1、實驗三部分均顯示4.5Gy X射線照后小鼠WBC、HGB、PLT即出現(xiàn)明顯下降，與Sham組比較有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01），且較照射前下降超過1/3，表明骨髓型ARD模型制作成功。2、d4、d7、d14、d21、d28 WBC、HGB、PLT計數(shù)，實驗第一部分CFA陰性對照組＜CFA預防和治療組＜CFA陽性對照組(P＜0.01

7、)，其中CFA預防和治療組中CFA高劑量預防組作用最強(P＜0.01);第二部分:富氫鹽水陰性對照組＜富氫鹽水治療組＜富氫鹽水預防組（P＜0.05）;第三部分:富氫鹽水預防組＜CFA高劑量預防組＜聯(lián)合組(P＜0.01)。3、輻射后d14小鼠BMNC、CFU-GM、CFU-MK、CFU-S、SI，實驗第一部分:陰性對照組＜CFA預防和治療組＜CFA陽性對照組（P＜0.05），其中CFA預防和治療組中CFA高劑量預防組作用最強（P＜0.05

8、）;第二部分:富氫鹽水陰性對照組＜富氫鹽水治療組＜富氫鹽水預防組（P＜0.05）;第三部分:富氫鹽水預防組＜咖啡酸高劑量預防組＜聯(lián)合組（P＜0.01）。4、d4、d14 G-CSF、TPO，實驗第一部分:CFA陰性對照組＜CFA預防和治療組＜CFA陽性對照組(P＜0.01)，其中CFA預防和治療組中CFA高劑量預防組作用最強(P＜0.05); d4、d14 TNF-α CFA陰性對照組＞CFA陽性對照組＞CFA高劑量預防組（P＜0.01

9、）;第二部分:d4、d14 G-CSF、TPO富氫鹽水陰性對照組＜富氫鹽水治療組＜富氫鹽水預防組(P＜0.01)而TNF-α富氫鹽水陰性對照組＞富氫鹽水治療組＞富氫鹽水預防組（P＜0.01）。第三部分:d4、d14G-CSF、TPO、1L-1β富氫鹽水預防組＜CFA高劑量預防組＜聯(lián)合組（P＜0.05）而TNF-α富氫鹽水預防組＞CFA高劑量預防組＞聯(lián)合組(P＜0.05)。第一部分和第二部分d4各受照組IL-1β均較Sham組明顯升高（P

10、＜0.01)，而各受照組間無明顯差異(P＞0.05)。d14IL-1β CFA陰性對照組＜CFA預防和治療組＜CFA陽性對照組(P＜0.05)，其中CFA預防和治療組中CFA高劑量預防組作用最強（P＜0.05）。5、d4、d14 MDA、8-OHdG，實驗第一部分:CFA陰性對照組＞CFA陽性對照組＞CFA預防和治療組（P＜0.01）而SOD CFA陰性對照組＜CFA陽性對照組＞CFA預防和治療組(P＜0.01)。CFA陽性對照組與CF

11、A預防組和治療組比較有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01），其中CFA高劑量預防組作用最強（P＜0.01）。第二部分:d4、d14 MDA、8-OHdG富氫鹽水陰性對照組＞富氫鹽水治療組＞富氫鹽水預防組(P＜0.01)而SOD富氫鹽水陰性對照組＜富氫鹽水治療組＜富氫鹽水預防組（P＜0.01）。第三部分:d4、d14 MDA、8-OHdG聯(lián)合組＜富氫鹽水預防組＜CFA高劑量預防組(P＜0.01)而SOD聯(lián)合組＞富氫鹽水預防組＞咖啡酸高劑量預防組

12、(P＜0.05)。6、CFA預防和治療組、富氫鹽水預防和治療組及聯(lián)合組d14 G-CSF、TPO、IL-1β較d4升高而TNF-α、MDA、SOD、8-OHdG較d4降低，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。7、CFA預防組和治療組對血細胞計數(shù)、BMNC、CFU-GM、CFU-MK、CFU-S、SI、造血調(diào)控因子、MDA、SOD、8-OHdG均有明顯劑量依賴性，隨劑量的增加而作用增強，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論

13、：
　　咖啡酸和富氫鹽水對骨髓型ARD均具有預防和治療作用，對骨髓造血恢復具有促進作用，二者聯(lián)合具有協(xié)同作用，作用機制可能為:
　　1、CFA和富氫鹽水通過提升輻射小鼠造血正性調(diào)控因子G-CSF、TPO、IL-1β水平，抑制造血負性調(diào)控因子TNF-α水平，從而促進骨髓造血;
　　2、CFA和富氫鹽水通過保護和刺激骨髓干/祖細胞增殖，促進骨髓造血恢復;
　　3、CFA和富氫鹽水保護脾臟，促進脾臟髓外造血;