骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在皮膚放射損傷救治中的作用.pdf

1、第一部分：人胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離純化及其生物學(xué)特性的研究 目的:體外分離、培養(yǎng)入胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(FMSCs)，并觀察其生物學(xué)特性，建立穩(wěn)定的FMSCs體外培養(yǎng)擴(kuò)增體系。 方法:取4個(gè)月胎齡的流產(chǎn)胎兒，無菌條件下分離胎兒四肢骨，PBS沖洗骨髓腔；采用Ficoll法分離胎兒骨髓腔沖洗液，離心后取單個(gè)核細(xì)胞層培養(yǎng)、擴(kuò)增、傳代，觀察細(xì)胞的形態(tài)，采用MTT法觀察細(xì)胞生長曲線及分裂指數(shù)曲線，研究其增殖及生長特征；應(yīng)用流式細(xì)

2、胞術(shù)測(cè)定FMSCs表面標(biāo)記，并觀察細(xì)胞生物學(xué)特性。 結(jié)果:接種2天后，貼壁細(xì)胞呈梭形、多角形、成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。10天后開始傳代，傳代培養(yǎng)的潛伏期為24-36h，對(duì)數(shù)增殖期約為2-3天，第6天進(jìn)入平臺(tái)期。傳代至15代后生長速度變慢；FCM檢測(cè)顯示，細(xì)胞高表達(dá)CD29、CD44及CD49e分子，低表達(dá)CD106、CD54、CD11b，而不表達(dá)CD34。 結(jié)論:采用Ficoll密度梯度離心、貼壁篩選法及單克隆培養(yǎng)法可以分離、

3、培養(yǎng)、擴(kuò)增出較均一的FMSCs，形態(tài)單一、生長穩(wěn)定、增殖性較強(qiáng)，可以用于細(xì)胞治療的進(jìn)一步研究。 第二部分：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)急性皮膚放射損傷的修復(fù) 目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)對(duì)皮膚局部急性放射損傷的修復(fù)作用。 方法：雄性昆明小鼠46只(25g±2g)，隨機(jī)選取40只以3.6％水合氯醛腹腔麻醉，以能量為4MeV的電子線(1Gy/min)照射小鼠臀部皮膚，面積為

4、2cm×1.5cm，總吸收劑量為40Gy，后將小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各20只。實(shí)驗(yàn)組照射后即刻經(jīng)尾靜脈注射經(jīng)CFDASE標(biāo)記的MSCs(2×1070.1ml)，對(duì)照組注射等量生理鹽水，剩余6只不做照射處理，僅經(jīng)尾靜脈注射等量MSCs。觀察實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組小鼠創(chuàng)面損傷情況及皮膚病理變化，免疫組化分析皮膚新生血管，觀察MSCs在皮膚中的分布情況、了解MSC在皮膚Ⅲ°放射損傷的修復(fù)中的作用。 結(jié)果：將MSCs經(jīng)尾靜脈移植入實(shí)驗(yàn)組小鼠