放射線照射引起肝癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的:
　　肝細(xì)胞癌（肝癌）在非洲東南部和亞洲發(fā)病率較高，我國(guó)也屬于高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)。由于多數(shù)肝癌患者伴有慢性肝炎、肝硬化等嚴(yán)重肝病，臨床上即使是局限期甚至早期肝癌患者，仍有部分患者不能接受手術(shù)治療。對(duì)于不能手術(shù)治療的局限期肝癌患者，臨床上可選擇局部消融治療和肝動(dòng)脈介入治療。而隨著對(duì)原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌放射生物學(xué)認(rèn)知的提高，現(xiàn)在認(rèn)為肝細(xì)胞性腫瘤為放射中度敏感性腫瘤，輻射敏感性相當(dāng)于頭頸部鱗狀細(xì)胞癌。當(dāng)前放射治療在原發(fā)性肝癌綜合治療中的

2、地位逐漸升高，適應(yīng)癥也愈來(lái)愈廣。然而接受放射治療后，仍有部分腫瘤細(xì)胞的存活，我們認(rèn)為殘留的腫瘤細(xì)胞是腫瘤發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。殘存腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力的改變?cè)谀[瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移過(guò)程之中有著重要意義。
　　近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞通過(guò)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)打破原先細(xì)胞與細(xì)胞之間的連接，已經(jīng)成為上皮細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移侵襲以及放療抵抗、化療耐藥的一個(gè)重要途徑。EMT以上皮細(xì)胞的極性喪失和削弱作為獲得的性能特點(diǎn)，包括細(xì)胞E-cad表達(dá)的減少，

3、細(xì)胞骨架由立方細(xì)胞的細(xì)胞角蛋白為主變?yōu)閂im為主的細(xì)胞骨架。此外，還有如骨橋蛋白，snail、β-catenin等表達(dá)的改變，在實(shí)驗(yàn)研究中，這些蛋白常作為發(fā)生EMT的標(biāo)志。
　　基于目前關(guān)于放射線照射對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力的不確定性，部分腫瘤細(xì)胞放療后其侵襲力增強(qiáng)，部分則相反，因此，我們選擇肝癌Sk-hep-1細(xì)胞株，探討放射線照射誘發(fā)肝癌細(xì)胞發(fā)生EMT的過(guò)程，進(jìn)一步探究其侵襲和轉(zhuǎn)移能力的改變。
　　方法:
　　采

4、用6MV X放射線照射Sk-hep-1肝癌細(xì)胞，照射總劑量為6Gy，并在不同時(shí)間點(diǎn)，分別設(shè)置為1小時(shí)，2小時(shí)，3小時(shí)后，顯微鏡下觀察放射線照射后，Sk-hep-1細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變，采用熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)所設(shè)時(shí)間點(diǎn)Sk-hep-1上皮細(xì)胞標(biāo)記物E-cad和Vim的蛋白和mRNA的表達(dá)。對(duì)照組不接受輻射，余處理同照射組。
　　結(jié)果:
　　放射線照射后，Sk-hep-1細(xì)胞出現(xiàn)顯著的EMT形態(tài)學(xué)

5、變化，細(xì)胞間隙增大，向間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)改變，熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，輻射后Sk-hep-1上皮標(biāo)記物E-cad的mRNA的表達(dá)下調(diào)，分別為對(duì)照組的66％，61％，20％，細(xì)胞的E-cad的蛋白表達(dá)也相應(yīng)降低，并有時(shí)間差異，均以三小時(shí)的最為顯著。而Vim的mRNA的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)，分別比對(duì)照組增加36％，45％，83％，細(xì)胞的Vim的蛋白表達(dá)也相應(yīng)增高，同樣以三小時(shí)的最為顯著，提示輻射后Sk-hep-1腫瘤細(xì)