n-3多不飽和脂肪酯飲食對小鼠肥胖的影響及fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠打靶載體的構(gòu)建.pdf

1、脂肪酸是維持人體正常生理功能的必須物質(zhì)，分為飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸。n-3多不飽和脂肪酸是一類備受醫(yī)學(xué)屆關(guān)注的多不飽和脂肪酸，已證明它的攝入具有抗腫瘤和防治代謝類疾病的作用。
　　 本實驗第一部分將健康小鼠分為高飽和脂肪酸飲食組、n-3多不飽和脂肪酸飲食組和對照組，記錄每周小鼠進(jìn)食量和體重，用ELISA法檢測小鼠血清脂聯(lián)素、增食因子A、抵抗素水平，來研究n-3多不飽和脂肪酸飲食對小鼠肥胖程度及相關(guān)細(xì)胞因子血清

2、水平的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)n-3多不飽和脂肪酸飲食組小鼠的肥胖程度明顯低于高飽和脂肪酸飲食組小鼠(P<0.05)，增食因子A和抵抗素的血清水平明顯低于高飽和脂肪酸飲食組小鼠(P<0.05)，脂聯(lián)素的血清水平低于高飽和脂肪酸飲食組小鼠但無統(tǒng)計學(xué)差異；n-3多不飽和脂肪酸飲食組小鼠的各項指標(biāo)和對照組均無統(tǒng)計學(xué)差異。因此認(rèn)為n-3多不飽和脂肪酸飲食和高飽和脂肪酸飲食相比，在為提供小鼠必需脂肪酸攝入的同時，更不易誘導(dǎo)肥胖的發(fā)生和發(fā)展。
　　

3、雖然攝入n-3多不飽和脂肪酸的生理功效已獲得了醫(yī)學(xué)屆的認(rèn)可，但大量獲得高純度的n-3多不飽和脂肪酸，特別是DHA和EPA的成本依然很高。如果將能表達(dá)n-3多不飽和脂肪酸的基因或編碼能將體內(nèi)其它物質(zhì)轉(zhuǎn)化為n-3多不飽和脂肪酸的酶的基因，通過轉(zhuǎn)基因的方法導(dǎo)入到常見的經(jīng)濟動物，如豬、牛、羊體內(nèi)，使人們在一日三餐中即可進(jìn)行n-3多不飽和脂肪酸的補充，將是一種解決大量獲得高純度的n-3多不飽和脂肪酸較困難現(xiàn)狀的有效途徑。
　　 在線蟲體內(nèi)

4、發(fā)現(xiàn)的fat-1基因，可編碼n-6多不飽和脂肪酸脫氫酶，該酶可將n-6多不飽和脂肪酸轉(zhuǎn)化為n-3多不飽和脂肪酸，從而改變體內(nèi)多不飽和脂肪酸比例。由于小鼠繁育較快，利用基因打靶技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因小鼠相對容易，因此首先獲得fat-1轉(zhuǎn)基因小鼠，對于利用fat-1基因來優(yōu)化經(jīng)濟動物的性狀，從而獲得大量含有n-3多不飽和脂肪酸的肉、蛋、乳制品具有前瞻性意義。
　　 本實驗第二部分，我們對fat-1基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化，增強該基因在小鼠體內(nèi)的高

5、效表達(dá)，把帶有啟動子和加尾信號的fat-1基因作為一個表達(dá)盒整合到通用打靶載體pSSC-IO上，之后在小鼠第11號染色體脂肪酸脫氫酶域家族6下游的DNA序列上找到一段基因空白區(qū)，依據(jù)GenBank上提供基因序列采用Primer5軟件設(shè)計兩對引物，以C57BL/6小鼠肝組織提取的DNA為模板，分別擴增長為3.4kb和1.4kb的片段作為同源短臂(SA)和同源長臂(LA)。再分別將同源長短臂克隆入pSSC-lO-fat-1中間載體上fat-