Fat-1轉(zhuǎn)基因牛的基礎(chǔ)性研究.pdf

1、ω-3 PUFAs對(duì)人類及其他哺乳動(dòng)物的健康極其重要，富含ω-3 PUFAs可以調(diào)節(jié)許多基因的表達(dá)進(jìn)而影響細(xì)胞的增值、生長(zhǎng)、凋亡以及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，上述這些作用對(duì)動(dòng)脈粥硬化、高血壓、冠心病、精神疾病與各種癌癥有重要影響。但是人類與哺乳動(dòng)物不能在體內(nèi)合成ω-3 PUFAs，需由食物中攝取來滿足需要。Fat-1基因編碼ω-3 PUFAs脫氫酶，它是ω-3 PUFAs合成的關(guān)鍵基因，可以將ω-6 PUFAs轉(zhuǎn)化為ω-3 PUFAs，從而提高機(jī)體

2、內(nèi)ω-3 PUFAs的含量。本實(shí)驗(yàn)通過動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)將fat-1基因轉(zhuǎn)入牛的基因組中，利用動(dòng)物克隆技術(shù)產(chǎn)生ω-3 PUFAs的轉(zhuǎn)基因牛。對(duì)轉(zhuǎn)基因牛中外源基因拷貝數(shù)的檢測(cè)和對(duì)?；蚪M表達(dá)影響的研究對(duì)認(rèn)識(shí) fat-1轉(zhuǎn)基因牛有重要意義。本實(shí)驗(yàn)主要利用Real-time PCR技術(shù)與芯片技術(shù)分別檢測(cè)了外源基因的拷貝數(shù)和對(duì)?；蚪M的影響。本試驗(yàn)得到的結(jié)果如下：
　　1.轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性牛的檢測(cè)
　　本實(shí)驗(yàn)首先用PCR法對(duì)兩頭轉(zhuǎn)基因牛進(jìn)行初

3、步檢測(cè)，然后再采用Southern雜交技術(shù)做進(jìn)一步的鑒定，結(jié)果顯示兩種方法得到了一致的結(jié)果，證明兩頭轉(zhuǎn)基因牛是陽(yáng)性牛，可以進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。
　　2.轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè)
　　本實(shí)驗(yàn)采用絕對(duì)定量 PCR法檢測(cè)外源基因拷貝數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Log2N=-3.16Ct+40.76（R2=0.9942），兩頭轉(zhuǎn)基因牛中外源基因拷貝數(shù)分別為4.62±1.03，5.46±1.26。
　　3.外源基因?qū)θ蚪M表達(dá)的影響
　　本實(shí)驗(yàn)