大鼠乳腺癌MRI靶向造影劑的實驗研究.pdf

1、目的：利用單克隆抗體LM609與釓雙胺制備抗體造影劑，并制備大鼠乳腺癌腫瘤模型，在MRI掃描機下觀察所制備的造影劑在大鼠乳腺癌模型中的靶向性。 方法：無菌條件下，取一定量的單克隆抗體LM609(1×10-3mg/mL)，按合理比例，加入適量的釓雙胺溶液(濃度為0.093ug/ml)，室溫下反應(yīng)12小時，形成復(fù)合物，將復(fù)合物移入透析袋(截留分子量8000)，用NaHCO3液透析24小時，除去游離的釓雙胺等。取四只干凈試管，向試管中

2、加入不同濃度比的抗體與釓雙胺連好的復(fù)合物，在磁共振掃描機下掃描，TR 300毫秒，TE 20毫秒，成像視野FOV為100mm×100mm，層厚：2毫米，矩陣256×256。每只試管分別做四次掃描，每次掃描采集次數(shù)分別為5次、10次、20次、40次。記錄所測得的信號值，通過信號的顯影強程度判斷單克隆抗體LM609與釓雙胺的連接情況以及抗體的免疫活性。無菌環(huán)境、適宜溫度下，培養(yǎng)清潔級SD大鼠15只，雌性，均為200克左右，每只大鼠皮下注射大

3、鼠乳腺癌細胞1×107個/ml約1ml，隨觀察瘤體生長情況，待2周左右瘤體生成后，將成瘤鼠隨機分為三組并編號，實驗組為10只，分為A、B兩組，對照組C組為5只；掃描前先將大鼠麻醉，于腹腔內(nèi)注射適量氯胺酮，約半小時后將大鼠仰臥位置于臺架上并固定，然后于頸部剝離頸靜脈，留置針插入。實驗組兩組均經(jīng)大鼠頸靜脈注射不同濃度的單克隆抗體造影劑，對照組注射與前者相同濃度的普通造影劑釓雙胺以備掃描。在MRI下用頭部線圈進行不同時刻掃描，觀察其不同時刻瘤

4、體的信號情況及代謝情況：Siemens 1.5 T MRI掃描機T1加權(quán)冠狀位及橫斷面掃描，TR300毫秒，TE20毫秒，翻轉(zhuǎn)角為FGR/30°，成像視野為120mm×120mm，層厚：2毫米，矩陣256×160。每個瘤體ROI值測定：每只大鼠瘤體上選擇3各興趣區(qū)，測其ROI值，然后計算其平均值。平掃及注射造影劑后每個時間點所選的興趣區(qū)位置及大小盡量保持一致，分別于注射造影劑前、注射造影劑即刻，6小時，12小時，24小時，36小時，48

5、小時不同時刻測量注射不同濃度對比劑瘤體的信號強度；最后，將實驗用大鼠處死，切除瘤體取標(biāo)本，常規(guī)石蠟包埋固定，并作蘇木素-伊紅(HE)染色，觀察其瘤體內(nèi)部結(jié)構(gòu)及分析結(jié)構(gòu)對信號的影響。統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行多個數(shù)據(jù)方差分析，再進行兩兩比較t檢驗，以P<0.05為顯著性意義。 結(jié)果： 1.四只裝有不同單克隆抗體與釓雙胺濃度比的試管在MRI掃描分別進行四次采集(每次采集次數(shù)分別為5次、10次、20次、40次)

6、，對所測得信號進行統(tǒng)計學(xué)分析得出： 1.1不同濃度比的四只試管信號值差異有統(tǒng)學(xué)意義。 1.2不同濃度比的四只試管所測信號值平均值依次為Mean=85.25，98.51，128.25，156.00結(jié)果顯示：單克隆抗體與釓雙胺的濃度比越大，所測得信號值越高，說明此時抗體與釓離子確實連接在一起，并且在一定濃度內(nèi)抗體的活性保持良好。 2.所有大鼠在MRI下進行不同時刻掃描，對所得三組測量信號強度值進行統(tǒng)計學(xué)分析得出：

7、 2.1.1實驗A組各掃描時間點之間瘤體信號值差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.1.2實驗A組增強后各掃描時間點與平掃瘤體信號值比較(各時間點的比較順序為：平掃、10min，平掃、6h，平掃、12h，平掃、24h，平掃、36h，平掃、48h，共組六組，結(jié)果顯示，實驗組A組瘤體在注射造影劑后6小時瘤體信號增加與平掃比較有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.1.3實驗A組增強后瘤體各時間點信號平均值為Mean=288.61，335.62，344.6

8、2，462.42，415.23，384.24其中在24小時掃描值最高，說明實驗A組瘤體在注射造影劑后24小時后信號達到最高。 2.2.1實驗組B各掃描時間點之間瘤體信號值差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.2.2實驗B組增強后各掃描時間點與平掃瘤體信號值比較,結(jié)果顯示實驗B組瘤體在注射造影劑后6小時瘤體信號增加與平掃比較有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.2.3實驗B組增強后瘤體各時間點信號平均值為Mean=268.60，347.81，39

9、9.64，482.63，421.82，386.64其中在24小時掃描值最高，說明實驗B組瘤體在注射造影劑后24小時后信號達到最高。 2.3.1對照組C組各掃描時間點之間瘤體信號值差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 2.3.2對照C組增強后各掃描時間點與平掃瘤體信號值比較,結(jié)果顯示：實驗C組瘤體注射釓雙胺后10分鐘、6小時內(nèi)信號增加與平掃比較有統(tǒng)計學(xué)意義，12小時以后無明顯差異。 2.3.3實驗C組增強后瘤體的信號平均值為Mean

10、=828.40，415.21，256.22，256.81，252.62，250.84其中在10分鐘掃描值最高，說明實驗C組瘤體在注射普通造影劑后即刻便可達到高峰，而隨時間推遲，造影劑逐漸排泄，信號逐漸降低。 結(jié)論： 1.體外表征的測定：裝有不同單克隆抗體與釓雙胺濃度比的四只試管所測得信號值有統(tǒng)計學(xué)意義(F=89.41)，說明抗體與釓離子確實連接。 2.動物實驗顯示，實驗AB兩組大鼠注射單克隆造影劑6小時后瘤體強化

11、信號值逐漸提高，在約24小時后腫瘤的強化值達到了最高。在48小時后瘤體仍有輕度不均勻強化，雖然強化信號較以前降低，但比平掃時仍呈稍高信號強化，且增強后各時間點信號強度有統(tǒng)計學(xué)意義。而對照組C組內(nèi)，瘤體則表現(xiàn)為造影劑快進快出的方式，在10分鐘時瘤體即達到最高強化且有統(tǒng)計學(xué)意義，而12小以后內(nèi)瘤體信號明顯下降，基本平掃時無差異。實驗說明所制備的單克隆抗體造影劑相比普通造影劑在瘤體強化的時間上有顯著性差異，從而進一步證明單克隆抗體造影劑可以對