人抗病毒基因-MxA轉(zhuǎn)染細胞株-NIH-3T3的建立及抗VSV病毒效應.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、構(gòu)建人的抗流感病毒基因-MxA(Myxovirus resistance protein A)克隆真核表達載體pEGFP-C1，再將pEGFP-C1-MxA轉(zhuǎn)染NIH-3T3細胞，通過G418抗性結(jié)合綠色熒光篩選出雙陽性細胞克隆，用本室制備的鼠抗MxA蛋白血清，對上述的細胞克隆進行Immunoblot分析和細胞免疫熒光/細胞免疫化學分析，并用RT-PCR技術(shù)對上述細胞中的MxA特異性序列進行分析鑒定，再用標準VSV病毒株攻擊進行抗病毒效

2、應試驗。結(jié)果顯示：pEGFP-C1-MxA轉(zhuǎn)染的NIH-3T3細胞經(jīng)G418抗性和綠色熒光蛋白篩選并經(jīng)二輪亞克隆篩選了3個雙陽性細胞克隆(1.4.5,4.3.6,3.2.16)和EGFP基因轉(zhuǎn)染克隆；以MxA基因與鼠Mxl基因非同源區(qū)的序列設(shè)計的特異的引物進行RT-PCR試驗三株均顯陽性，Immunoblot分析三株細胞表現(xiàn)強陽性，免疫細胞化學分析顯示上述三株細胞有大于98％的細胞表現(xiàn)為強陽性。VSV抗性試驗表明：在感染50 PFU(p

3、lague formation Units)/孔的VSV后，在(4.3.6,3.2.16)細胞株均未發(fā)現(xiàn)空斑，而(1.4.5)細胞克隆中只出現(xiàn)少量空斑，對照組中出現(xiàn)大量的空斑。在0.001 TCID50 VSV對細胞感染48h后病毒產(chǎn)量分別是(4.3.6，3.2.16,1.4.5)3.5X103和4,8X1O3和5.3X105而對照組中病毒產(chǎn)量為3.5X106。三株細胞表現(xiàn)出強烈的抗VSV活性(TCID50提高了1000X)。上述的結(jié)果

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