軟脂酸對酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細胞的影響.pdf

1、目的:根據(jù)前期試驗選擇合適濃度的乙醇建立酒精體外誘導(dǎo)的肝細胞脂肪變性模型，確定不同濃度的軟脂酸對酒精體外誘導(dǎo)的肝細胞脂肪變性及損傷的影響，并探討其影響機制。
　　 方法:根據(jù)前期試驗，選擇對細胞存活率影響不大且可以建立肝細胞脂肪變性模型的乙醇濃度為制備本實驗肝細胞脂肪變性模型的乙醇濃度(0.6％)，采用MTT法測定不同濃度的軟脂酸(2.5、5、10、20、30、40μmol/L)對酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細胞存活率的影響，光學(xué)顯

2、微鏡觀察不同組別油紅O染色情況，全自動生化儀檢測細胞培養(yǎng)基中ALT、AST泄露量，試劑盒檢測各組細胞內(nèi)甘油三酯(TG)水平，采用Westernblot法檢測各組細胞核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達量。
　　 結(jié)果:
　　 1.用MTT法測得酒精誘導(dǎo)組的肝細胞的存活率較空白對照組降低；軟脂酸干預(yù)后，與酒精誘導(dǎo)組相比，當軟脂酸濃度≤10μmol/L時，肝細胞的存活率增高；當軟脂酸的濃度≥20μmol/L時，細胞的存活率則降低，

3、且隨著軟脂酸濃度的增加存活率依次降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 2.肝細胞在加入了含0.6％的乙醇的培基中培養(yǎng)大于或等于兩天，油紅O染色可見肝細胞胞漿內(nèi)含有大小不一被染成橘紅色的脂滴，而空白對照組肝細胞內(nèi)無明顯脂滴形成。如同時加入軟脂酸共同培養(yǎng)48小時，當軟脂酸濃度≤10μmol/L時，肝細胞內(nèi)的脂滴較酒精誘導(dǎo)組減少，且軟脂酸濃度越大，減少作用越明顯；相反，當軟脂酸濃度≥20μmol/L時，肝細胞內(nèi)脂滴增加，且隨

4、著軟脂酸濃度的增大，增加作用越明顯。
　　 3.用0.6％的乙醇干預(yù)人正常肝細胞L-02后ALT、AST泄漏量、細胞內(nèi)TG含量均比空白對照組高(P<0.05)；軟脂酸共同培養(yǎng)48小時后，與酒精誘導(dǎo)組相比，當軟脂酸濃度≤10μmol/L時，上述指標均降低，且隨著軟脂酸濃度的增加而依次降低(P<0.05)，當軟脂酸濃度>20μmol/L時，上述指標均升高，ALT、AST隨軟脂酸濃度的升高而依次升高(P<0.05)，當軟脂酸濃度為40

5、μmol/L時TG的量較20、30μmol/L時降低(P<0.05)。
　　 4.用0.6％的乙醇干預(yù)后肝細胞核內(nèi)成熟的SREBP-1 c的表達量較空白對照組升高(P<0.05)；軟脂酸共同培養(yǎng)48小時后，與酒精誘導(dǎo)組相比，當軟脂酸濃度≤10μmol/L時，核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達量降低，且隨軟脂酸濃度的增加而依次降低(P<0.05)；當軟脂酸濃度≥20μmol/L時，核內(nèi)成熟的SREBP-1c表達量升高，且隨著軟脂酸濃度

6、的增加而依次增高(P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.0.6％的乙醇作用于肝細胞兩天或多于兩天可以建成肝細胞脂肪變性模型，并且可以引起肝酶泄漏量的增高，且肝細胞脂肪變性與核內(nèi)成熟的SREBP-1c的表達量增高有關(guān)。
　　 2.軟脂酸干預(yù)后，在一定濃度內(nèi)對酒精體外誘導(dǎo)的脂肪變性肝細胞有防治作用，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系；超出一定濃度卻反過來加重肝細胞的脂肪變性。
　　 3.軟脂酸對酒精誘導(dǎo)的脂肪變性肝細胞的影