羊棲菜多糖對(duì)軟脂酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞氧化損傷及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 1．利用體外培養(yǎng)的正常人肝細(xì)胞株(L02)，觀察羊棲菜多糖(SargassumFusiformePolysaccharides，SFPS)對(duì)軟脂酸(palmiticacid，PA)誘導(dǎo)的L02細(xì)胞氧化損傷及凋亡的影響。
　　 2．初步探討羊棲菜多糖對(duì)軟脂酸誘導(dǎo)的L02細(xì)胞氧化損傷及凋亡的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．不同濃度的SFPS(0，25，50，100，200，400，800μg

2、/ml)及PA(0，0.25，0.5，1.0mmol/L)分別干預(yù)L02細(xì)胞，四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活性，以確定羊棲菜多糖及軟脂酸的有效濃度。
　　 2．不同濃度的SFPS(0，25，50，100μg/ml)預(yù)處理L02細(xì)胞24h，而后加入有效濃度的PA(0.5mmol/L)干預(yù)48h，分別記作模型組、SFPS-L組、SFPS-M組、SFPS-H組，MTT比色法檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖活性。
　　 3

3、．經(jīng)第2步分組及處理，收集細(xì)胞，AnnexinV-FITC標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。
　　 4．經(jīng)第2步分組及處理，收集上清液及細(xì)胞，硫代巴比妥酸法(thibabituricacid，TBA)測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的丙二醛(Maleicdialdehyde,MDA)含量，黃嘌呤氧化酶比色法測(cè)定上清液中的超氧化物岐化酶(Superoxidedismutase，SOD)活性。
　　 5．經(jīng)第2步分組及處理，收集細(xì)胞提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈

4、反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)凋亡調(diào)控基因Bcl-2和BaxmRNA的表達(dá)并計(jì)算其比值(Bcl-2/Bax)。
　　 結(jié)果：
　　 1．SFPS不同濃度(0，25，50，100，200，400，800μg/ml)干預(yù)24h，促進(jìn)細(xì)胞增殖活性的作用在25～100μg/ml濃度范圍內(nèi)呈劑量相關(guān)性，100μg/ml濃度組效果最明顯。但隨著濃度繼續(xù)增高此作用下降，當(dāng)濃度為800μg/ml時(shí)反而抑制細(xì)胞的增殖活性。PA不同濃度(0，0.

5、25，0.5，1．Ommol/L)分別干預(yù)24h、48h，0.5mmol/LPA干預(yù)48h的增殖抑制率為35.1％，接近半數(shù)抑制率，且光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，不會(huì)使細(xì)胞大量裂解死亡，可作為誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的最佳濃度。
　　 2.0.5mmol/LPA干預(yù)48h的細(xì)胞存活率為(65.00±2.98)％，以此干預(yù)條件建立模型組。而在PA誘導(dǎo)細(xì)胞前，以不同濃度SFPS(25，50，100μg/ml)預(yù)處理24h，即SFPS-L組、SFPS-M

6、組、SFPS-H組，可使L02細(xì)胞存活率分別提高至(69.97±3.09)％、(75.55±3.31)％、(84.10±3.69)％(均P＜0.05)。
　　 3．正常對(duì)照組的L02細(xì)胞凋亡率為(4.9±2.1)％；而模型組可誘導(dǎo)(39.8±4.7)％的L02細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。SFPS預(yù)處理能夠降低細(xì)胞凋亡率，SFPS-L組、SFPS-M組、SFPS-H組的細(xì)胞凋亡率分別為(35.5±5.2)％、(28.2±3.3)％、(17.1±

7、2.8)％，與模型組相比，均有顯著的降低(均P＜0.05)。
　　 4．模型組的上清液中SOD活性明顯低于對(duì)照組，預(yù)先加入不同濃度SFPS可增加SOD活性，其中50、100μg/ml濃度組與模型組比較有顯著性差異(均P＜0.05)。模型組的細(xì)胞中MDA含量明顯高于對(duì)照組，預(yù)先加入不同濃度SFPS的保護(hù)組均可減少M(fèi)DA的含量(均P＜0.05)。
　　 5．與對(duì)照組相比，模型組L02細(xì)胞BaxmRNA的表達(dá)明顯升高，Bcl-

8、2mRNA的表達(dá)及Bcl-2/Bax明顯下降(均P＜0.05)。不同濃度SFPS預(yù)處理24h后，SFPS-L組對(duì)Bcl-2mRNA表達(dá)的影響較小(P＞0.05)，SFPS-M組、SFPS-H組的Bcl-2mRNA的表達(dá)明顯升高(均P＜0.05);SFPS-L組、SFPS-M組、SFPS-H組BaxmRNA的表達(dá)均明顯降低（均P＜0.05）；且與模型組相比，SFPS-M組、SFPS-H組的Bcl-2/Bax比值明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P