枳椇子水提取液對乙醇體外誘導肝細胞株L02細胞損傷的影響.pdf

1、目的:
　　 建立不同濃度乙醇誘導的體外肝細胞損傷模型，探討不同濃度乙醇對L-O2細胞肝酶泄漏量、氧化應激、脂質(zhì)過氧化及NF-KB1(P65)蛋白表達的影響。并確定枳椇子水提取液對乙醇誘導的體外肝細胞損傷是否有防治作用及其機制。
　　 方法:
　　 采用MTT法篩選乙醇誘導肝細胞損傷的適宜濃度(0.3％、0.6％、1.2％、2.4％)，選擇最適濃度的枳椇子水提取液對損傷模型進行干預，原位裝載探針法測定細胞內(nèi)ROS

2、水平，全自動生化儀檢測培養(yǎng)上清液ALT、AST泄露量，試劑盒檢測細胞內(nèi)MDA、GSH含量，免疫細胞化學法檢測細胞內(nèi)NF-KB1(P65)蛋白的表達強度及定位。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT法示當乙醇濃度低于0.2％時細胞成活率比正常組稍高。當乙醇濃度大于0.3％時，細胞存活率隨濃度升高而降低但均大于80％。當乙醇濃度大于2.4％時，與正常組相比細胞存活率下降最明顯(P＜0.05)且大部分細胞漂浮，因此選定0.3％-2.

3、4％濃度為最適損傷濃度。
　　 2.ROS結(jié)果顯示正常組細胞內(nèi)可見少量較弱熒光。隨乙醇濃度增加熒光增多增強，2.4％乙醇組最強，但細胞數(shù)量減少。加入枳椇子水提取液治療后各組熒光均減弱。
　　 3.乙醇干預肝細胞后培養(yǎng)上清液ALT、AST均比正常組升高(P＜0.05)，且隨乙醇濃度升高而升高。加入枳椇子水提取液治療后均下降(P＜0.05)。
　　 4.乙醇作用于肝細胞后細胞內(nèi)MDA均比正常組升高(P＜0.05)，且

4、隨乙醇濃度升高而升高。而GSH則比正常組下降(P＜0.05)，且隨乙醇濃度升高不斷下降。加入枳椇子水提取液治療后MDA均下降而GSH均升高(P＜0.05)。
　　 5.免疫細胞化學示正常組肝細胞胞漿內(nèi)有少量NF-KB1(P65)蛋白表達。隨乙醇濃度增加，胞漿胞核內(nèi)該蛋白表達增加(P＜0.05)，但1.2％乙醇組與2.4％乙醇組無明顯差異(P＞0.05)。枳椇子水提取液治療后表達減弱(P＜0.05)。
　　 結(jié)論: