腫瘤抑制基因RECK對(duì)骨肉瘤侵襲生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤抑制基因RECK對(duì)骨肉瘤侵襲生物學(xué)行為影響的研究姓名：徐亮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：骨科學(xué)指導(dǎo)教師：楊述華20090401華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文第二部分轉(zhuǎn)染RECK基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞MMP2活化及侵襲轉(zhuǎn)染RECK基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞MMP2活化及侵襲能力的影響研究能力的影響研究[目的][目的]觀察轉(zhuǎn)染RECK基因?qū)θ斯侨饬霭礛G63的MMP2活化及細(xì)胞侵襲力的影響。[方法]方法]以脂質(zhì)

2、體Lipofectamine?2000介導(dǎo)的方法將含RECK全長(zhǎng)基因的真核重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3RECK轉(zhuǎn)染入MG63細(xì)胞。RTPCR、Westernblot、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)目的基因的表達(dá)；明膠酶譜法、Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)MG63細(xì)胞上清的MMP2活化比例及細(xì)胞侵襲力變化；四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比色法和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線法觀察質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞的毒性情況。[結(jié)果]結(jié)果]轉(zhuǎn)染后RECK基因在MG63細(xì)胞mRNA和蛋白水平分別有

3、穩(wěn)定獨(dú)立表達(dá)；明膠酶譜結(jié)果顯示，正常對(duì)照組與空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的MMP2活化比例分別為(0.720.11)(0.800.14)，二組間差異無(wú)顯著性意義；重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組MMP2活化比例為(0.230.03)，與正常對(duì)照組、空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組比較明顯降低，差異有顯著性意義（均P＜0.01）。Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：正常對(duì)照組與空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的穿至微孔膜下表面的細(xì)胞數(shù)分別為(28.182.15)和(30.252.23)，兩組間差異無(wú)顯著

4、性意義（P＞0.05）。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組穿透Matrigel至微孔膜下表面的細(xì)胞數(shù)為(14.201.26)，明顯低于正常對(duì)照組、空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組，差異有顯著性意義（均P＜0.05）。而MTT法測(cè)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線與空白對(duì)照組、空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組無(wú)明顯差異（均P＞0.05）。[結(jié)論]結(jié)論]RECK基因過(guò)表達(dá)可顯著減少骨肉瘤細(xì)胞MG63的MMP2活化及其侵襲能力，RECK基因可能成為腫瘤治療的新的靶點(diǎn)。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]RECK基因；骨肉瘤；