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1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤抑制基因RECK對骨肉瘤侵襲生物學(xué)行為影響的研究姓名:徐亮申請學(xué)位級別:博士專業(yè):骨科學(xué)指導(dǎo)教師:楊述華20090401華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文第二部分轉(zhuǎn)染RECK基因?qū)θ斯侨饬黾毎鸐MP2活化及侵襲轉(zhuǎn)染RECK基因?qū)θ斯侨饬黾毎鸐MP2活化及侵襲能力的影響研究能力的影響研究[目的][目的]觀察轉(zhuǎn)染RECK基因?qū)θ斯侨饬霭礛G63的MMP2活化及細胞侵襲力的影響。[方法]方法]以脂質(zhì)
2、體Lipofectamine?2000介導(dǎo)的方法將含RECK全長基因的真核重組表達質(zhì)粒pcDNA3RECK轉(zhuǎn)染入MG63細胞。RTPCR、Westernblot、流式細胞術(shù)檢測目的基因的表達;明膠酶譜法、Matrigel侵襲實驗分別檢測MG63細胞上清的MMP2活化比例及細胞侵襲力變化;四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法和細胞生長曲線法觀察質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染對細胞的毒性情況。[結(jié)果]結(jié)果]轉(zhuǎn)染后RECK基因在MG63細胞mRNA和蛋白水平分別有
3、穩(wěn)定獨立表達;明膠酶譜結(jié)果顯示,正常對照組與空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細胞的MMP2活化比例分別為(0.720.11)(0.800.14),二組間差異無顯著性意義;重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組MMP2活化比例為(0.230.03),與正常對照組、空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組比較明顯降低,差異有顯著性意義(均P<0.01)。Matrigel侵襲實驗結(jié)果顯示:正常對照組與空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的穿至微孔膜下表面的細胞數(shù)分別為(28.182.15)和(30.252.23),兩組間差異無顯著
4、性意義(P>0.05)。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組穿透Matrigel至微孔膜下表面的細胞數(shù)為(14.201.26),明顯低于正常對照組、空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,差異有顯著性意義(均P<0.05)。而MTT法測重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組細胞生長曲線與空白對照組、空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組無明顯差異(均P>0.05)。[結(jié)論]結(jié)論]RECK基因過表達可顯著減少骨肉瘤細胞MG63的MMP2活化及其侵襲能力,RECK基因可能成為腫瘤治療的新的靶點。[關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞]RECK基因;骨肉瘤;
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