A-,2B-腺苷受體拮抗劑XAC對(duì)小鼠哮喘模型的干預(yù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的：哮喘是兒科常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，其主要特點(diǎn)是慢性氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性，臨床常反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重地威脅著兒童的健康和生長(zhǎng)發(fā)育。其發(fā)病機(jī)理十分復(fù)雜，目前發(fā)現(xiàn)腺苷在支氣管哮喘等氣道炎癥性疾病中水平增高，對(duì)支氣管痙攣和收縮起著重要的作用。吸入腺苷能引發(fā)哮喘病人的支氣管痙攣。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)腺苷可通過(guò)作用于肥大細(xì)胞膜上的A2B腺苷受體(A2BAR)，促進(jìn)肥大細(xì)胞釋放白介素8(Interleukin-8，IL-8)等細(xì)胞因子，引發(fā)氣道的炎癥過(guò)程。因

2、此，推測(cè)選擇性的A2BAR拮抗劑，能有效阻斷氣道炎癥介質(zhì)釋放及支氣管痙攣。本研究通過(guò)檢測(cè)哮喘小鼠的肺組織A2BAR表達(dá)陽(yáng)性反應(yīng)物的光密度值和光灰度值、支氣管壁和氣道平滑肌厚度，及血清中的IL-8的水平，旨在觀察A2BAR拮抗劑XAC(Xanthineaminecongener)對(duì)卵白蛋白(Ovalbumin)激發(fā)的小鼠哮喘模型的干預(yù)作用，探討A2BAR在支氣管哮喘氣道炎癥發(fā)病機(jī)理中的作用，為臨床應(yīng)用A2BAR拮抗劑治療哮喘提供理論依據(jù)。

3、 方法：選取鼠齡六周、雄性、健康純系BALB/c小鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為三組：正常對(duì)照組10只、哮喘模型組10只、XAC組20只；其中XAC組又根據(jù)給予劑量不同，分為XAC小劑量組10只、XAC大劑量組10只。僅正常組給予生理鹽水作為正常對(duì)照，余均用OVA分別于第1天、13天、19天腹腔注射，于第20天開(kāi)始連續(xù)霧化吸入OVA溶液25天，建立哮喘模型。XAC組于實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第20天開(kāi)始腹腔注射不同劑量XAC，每4天注射

4、一次，各組小鼠分別于最后一次霧化后24h眼球放血處死；取出雙側(cè)肺組織，采用HE染色、免疫組織化學(xué)法結(jié)合計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)測(cè)定各組支氣管壁厚度和氣道平滑肌厚度，以及肺組織表達(dá)A2BAR的陽(yáng)性反應(yīng)物光密度值和光灰度值，并采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定血清中IL-8的水平，通過(guò)觀察哮喘小鼠氣道重塑相關(guān)數(shù)值、血清中IL-8的水平及A2BAR表達(dá)的變化；探討XAC對(duì)哮喘小鼠模型的干預(yù)作用。所得數(shù)據(jù)均用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，統(tǒng)計(jì)方

5、法為單因素方差分析(one-wayANOVA)，最小顯著差異法(LSD法)進(jìn)行不同組別之間的兩兩比較。以P＜0.05作為顯著界限。 結(jié)果1HE染色及光鏡觀察：正常組小支氣管，細(xì)支氣管，伴行的小動(dòng)脈及肺泡結(jié)構(gòu)正常。哮喘組管壁周?chē)M織及肺間質(zhì)有大量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肺段支氣管上皮皺折明顯，黏膜下大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，上皮層變厚并有明顯痙攣縮窄，支氣管平滑肌增厚，管腔狹窄變形，并有伴行小動(dòng)脈管壁增厚，管腔閉塞，肺外支氣管亦顯示

6、類(lèi)似改變，肺泡隔水腫增厚，肺泡內(nèi)充滿分泌物及炎性細(xì)胞。XAC組炎癥反應(yīng)較輕，支氣管旁炎癥細(xì)胞及肺泡內(nèi)分泌物明顯減少，支氣管平滑肌增厚及管腔狹窄變形均明顯較哮喘組減輕。XAC大劑量組與XAC小劑量組間光鏡觀察無(wú)明顯區(qū)別。 2支氣管壁厚度和支氣管平滑肌厚度：正常組支氣管壁厚度22.31±6.02μm2/μm，平滑肌厚度7.70±1.67μm2/μm；哮喘組支氣管壁厚度33.52±8.99μm2/μm，平滑肌厚度14.18±3.22μ

7、m2/μm，XAC小劑量組支氣管壁厚度28.04±6.01μm2/μm，平滑肌厚度10.91±3.13μm2/μm；XAC大劑量組支氣管壁厚度27.16±3.34μm2/μm，平滑肌厚度11.22±2.57μm2/μm。正常組與哮喘組、XAC小劑量組、XAC大劑量組間差異均有顯著性(P＜0.05)，哮喘組與XAC小劑量組、XAC大劑量組間差異均有顯著性(P＜0.05)，XAC大劑量組與XAC小劑量組間比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，哮

8、喘小鼠管壁明顯增厚，平滑肌增生，氣道重塑明顯，XAC組小鼠氣道重塑有所改善。 3光密度及光灰度值觀察：正常組光密度值0.121±0.021，光灰度值162.18±19.26；哮喘組光密度值0.190±0.307，光灰度值115.07±14.56；XAC小劑量組光密度值0.114±0.230，光灰度值164.85±14.99；XAC大劑量組光密度值0.112±0.191，光灰度值164.17±16.43。哮喘組與正常組、XAC小劑

9、量組、XAC大劑量組間差異均有顯著性(P＜0.05)，正常組、XAC小劑量組、XAC大劑量組間差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。哮喘小鼠A2BAR表達(dá)明顯增多，正常組、XAC小劑量組、XAC大劑量組間A2BAR表達(dá)幾乎無(wú)差別。 4血清IL-8水平：正常組血清IL-8：3.95±0.36ng/L，哮喘組血清IL-8ng/L：20.28±0.51ng/L，XAC小劑量組血清IL-8：7.93±0.53ng/L，XAC大劑量組血清IL-8

10、：8.33±0.58ng/L。正常組與哮喘組、XAC小劑量組、XAC大劑量組間差異均有顯著性(P＜0.05)，哮喘組與XAC小劑量組、XAC大劑量組間差異均有顯著性(P＜0.05)，XAC大劑量組與XAC小劑量組間比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，哮喘小鼠血清IL-8水平較正常組明顯增高，XAC組小鼠血清IL-8水平較哮喘組明顯降低。 結(jié)論1哮喘小鼠支氣管平滑肌增厚，氣道不同程度狹窄變形，肺間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血清IL-8水平

11、明顯增高，提示哮喘患者氣道炎癥介質(zhì)分泌增多，氣道狹窄，存在不同程度的氣道重塑。 2哮喘患者A2BAR表達(dá)明顯增多，其促進(jìn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，增加IL-8等炎癥因子分泌，加重氣道損傷，與哮喘患者氣道炎癥及高反應(yīng)性密切相關(guān)。 3A2BAR拮抗劑可減少I(mǎi)L-8炎癥因子的分泌，抑制氣道壁膠原沉積和平滑肌增生，改善支氣管壁增厚重塑，A2BAR拮抗劑有望成為新型的抗哮喘藥物。 4在應(yīng)用XAC對(duì)哮喘小鼠模型干預(yù)治療過(guò)程中，XAC大劑