腺苷A2b受體通過TNF-α介導(dǎo)哮喘急性發(fā)作的作用機(jī)制.pdf

1、目的：支氣管哮喘是兒童最常見的慢性呼吸道疾病。腺苷A2b受體(A2bAR)在哮喘中具有促炎癥反應(yīng)的作用，但其如何介導(dǎo)哮喘急性發(fā)作仍未完全清楚。本研究擬通過建立哮喘急性期小鼠模型，使用A2bAR拮抗劑(CVT-6883)、重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體-抗體融合蛋白（依那西普）干預(yù)，探討A2bAR通過TNF-α介導(dǎo)哮喘急性發(fā)作的作用機(jī)制。
　　 方法：⑴使用清潔級(SPF)雌性BALB/c小鼠以卵蛋白(OVA)致敏和激發(fā)建立哮喘急性期

2、小鼠模型。⑵實(shí)驗(yàn)分組:按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為A（對照組）、B（哮喘組）、C（CVT-6883組），D（CVT-6883+依那西普組）及E（依那西普組）。于最后一次激發(fā)24小時后處死小鼠，采集標(biāo)本。⑶采用細(xì)胞計數(shù)法檢測各組小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)里的白細(xì)胞(WBC)總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)數(shù)。⑷各組肺組織進(jìn)行病理切片并分別蘇木素-伊紅(HE)染色和碘酸希夫(PAS)染色，觀察肺組織的病理改變和黏液產(chǎn)生情況。⑸采用酶聯(lián)免疫吸附測

3、定法(ELISA)檢測BALF中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的水平。⑹采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測各組肺組織中A2bARmRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：①哮喘組小鼠肺組織HE染色表現(xiàn)出大量炎性細(xì)胞浸潤，粘膜增厚，肺泡間隔增寬、斷裂; CVT-6883組、依那西普組及CVT-6883+依那西普組較哮喘組可見上述病理改變減輕;CVT-6883組較CVT-6883+依那西普組病理改變減輕。PAS染色顯示哮喘組黏液

4、指數(shù)（2.83±0.99）較對照組(0)明顯增大(P＜0.05)，上皮層杯狀細(xì)胞肥大增生。CVT-6883組（0.15±0.02）、依那西普組（0.18±0.04）及CVT-6883+依那西普組（0.72±0.11）的黏液指數(shù)較哮喘組減小(P＜0.05);CVT-6883組黏液指數(shù)較CVT-6883+依那西普組減小(P＜0.05)。②哮喘組小鼠WBC總數(shù)（41.38±5.81×104/ml）及EOS數(shù)（13.93±1.44×104/ml

5、）均明顯高于正常對照組（2.40±1.28×104/ml，0.18±0.09×104/ml，P＜0.05）;CVT-6883組（11.15±3.83×104/m1，0.33±0.11×104/ml）、依那西普組（13.84±3.02×104/ml，0.41±0.09×104/ml）及CVT-6883+依那西普組(17.38±3.86×104/ml，1.04±0.23×104/ml)與哮喘組相比均明顯減少（P＜0.05）;而CVT-688

6、3+依那西普組較CVT-6883組明顯增加(P＜0.05)。③與對照組相（100.4±5.68 pg/ml）比較，哮喘組（145.24±8.81 pg/ml）的TNF-α濃度明顯升高(P＜0.05);CVT-6883組（130.87±5.88 pg/ml）、CVT-6883+依那西普組（115.71±8.23 pg/ml）及依那西普組（121.96±8.66 pg/ml）TNF-α濃度較哮喘組明顯下降(P＜0.05），而且CVT-688

7、3+依那西普組與CVT-6883組相比，TNF-α濃度明顯降低(P＜0.05）;然而依那西普組與CVT-6883組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。④哮喘組（8.90±1.09）與正常對照組（0.63±0.19）相比，A2bAR mRNA表達(dá)增多(P＜0.05)。CVT-6883組（1.63±0.32）和依那西普組（5.33±0.41）的A2bARmRNA表達(dá)量均較哮喘組減少(P＜0.05）。而CVT-6883+依那西普組（2.48

8、+0.59）較CVT-6883組，A2bAR mRNA表達(dá)量相對增多(P＜0.05）。⑤肺組織的A2bAR mRNA表達(dá)與黏液指數(shù)、BALF里的TNF-α水平及WBC和EOS的關(guān)系均呈密切正相關(guān)(P＜0.05）。BALF里的TNF-α水平與WBC的關(guān)系呈密切正相關(guān)(P＜0.05)，BALF里的TNF-α水平與EOS、黏液指數(shù)的關(guān)系呈正相關(guān)(P＜0.05）。
　　 結(jié)論：A2bAR在哮喘急性期中的作用機(jī)制是，通過誘導(dǎo)肺組織釋放TN