補(bǔ)益肺腎法對(duì)SD大鼠哮喘急性發(fā)作期作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的通過制備支氣管哮喘急性期SD大鼠模型，研究哮喘模型大鼠在發(fā)作期運(yùn)用清肺飲合百令膠囊干預(yù)治療后的一般生活狀態(tài)、肺功能、肺組織形態(tài)學(xué)、細(xì)胞因子等相應(yīng)指標(biāo)的變化情況，初步探討補(bǔ)益肺腎法對(duì)哮喘發(fā)作期是否有作用及其作用機(jī)制。 方法哮喘模型參照呂國平等介紹的方法，分致敏和激發(fā)兩步。致敏：用1ml0.9％NaCL配制的OVA混懸液(100mgOVA+100mg氫氧化鋁+百日咳桿菌6×109個(gè))開始隔天腹腔注射，直至第14天。激發(fā)：從第15

2、天起模型組動(dòng)物被放在一密閉的霧化箱內(nèi)(60×60×40cm)，每組10只，霧化吸入生理鹽水配制的3％OVA(流量為3ml/min)，每天一次，每次20分鐘，直至第28天。 指標(biāo)：主要觀察一般生活狀態(tài)；用小型動(dòng)物肺功能儀測(cè)定肺功能；觀察肺組織形態(tài)學(xué)；ELISA法測(cè)定血清IL-4、IL-5、IFN-γ、TNF-α含量。 統(tǒng)計(jì)方法：所有數(shù)據(jù)以-x±s表示，采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行檢驗(yàn)， 結(jié)果1.比較各實(shí)驗(yàn)組大

3、鼠一般生活狀態(tài)變化主要觀察各實(shí)驗(yàn)組大鼠各時(shí)間點(diǎn)體重的變化和各實(shí)驗(yàn)組大鼠被激發(fā)時(shí)癥狀表現(xiàn)。①在致敏前、激發(fā)前、激發(fā)一周、激發(fā)兩周各時(shí)間點(diǎn)中，激發(fā)前正常組和其余各組大鼠體重有差異，正常組大鼠體重高于其余各組(P＜0.05)；在激發(fā)一周和兩周中，地米組大鼠體重顯著低于其余各組(P＜0.01)。清肺飲合高中低劑量百令膠囊組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 ②各實(shí)驗(yàn)組大鼠被激發(fā)時(shí)癥狀表現(xiàn)：正常對(duì)照組大鼠表現(xiàn)精神活潑，反應(yīng)靈敏，呼吸平穩(wěn)，

4、毛色光潔，無任何一只出現(xiàn)呼吸急促、困難或喘鳴音。模型組大鼠在吸入OVA不久即出現(xiàn)躁動(dòng)不安，搔抓顏面皮毛等過敏癥狀，繼而大鼠俯伏不動(dòng)，出現(xiàn)呼吸急促，呼吸困難(明顯的腹式呼吸)伴輕度紫鉗，部分大鼠可聞及響亮的呼氣相喘鳴音，口鼻流出粘液，可出現(xiàn)呼吸不規(guī)則。反復(fù)激發(fā)后大鼠毛色失去光澤，精神不振和反應(yīng)遲鈍。 與哮喘模型組比較，清肺飲組癥狀減輕，仍有呼吸急促，呼吸困難，伴輕度紫紺，部分大鼠可聞及呼氣相喘鳴音；地米組在激發(fā)后一直呼吸道癥狀較輕

5、，但從激發(fā)開始用藥即出現(xiàn)飲水增多，迅速消瘦等陰虛陽亢表現(xiàn)，激發(fā)一周后部分大鼠出現(xiàn)倦臥，呼吸微弱困難；清肺飲合百令膠囊組出現(xiàn)呼吸急促，困難，但喘鳴音等癥狀明顯減輕，且無地米組大鼠的上述陰虛陽亢癥狀。 在清肺飲合高中低劑量百令膠囊比較中，中劑量和高劑量組較低劑量組癥狀有明顯好轉(zhuǎn)，出現(xiàn)呼吸急促和呼吸困難癥狀較輕，大鼠毛色光澤較好，精神也較好。 2.支氣管肺組織病理學(xué)改變與正常組比較：模型組支氣管上皮及管壁增厚，上皮破壞和脫落明

6、顯，可見上皮中斷、壞死，管腔明顯狹窄，杯狀細(xì)胞增生明顯，管腔可見粘液栓阻塞，大中氣道和血管周圍可見大量的嗜酸細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤，支氣管和血管平滑肌輕度增生，可見吞噬細(xì)胞增多，肺泡間隔明顯增寬。 與模型組比較：清肺飲合百令膠囊組支氣管管腔基本正常，上皮輕度增生，管腔未見明顯狹窄，管壁無明顯炎癥，少數(shù)支氣管周圍有淋巴細(xì)胞侵潤灶，支氣管和血管平滑肌輕度增生，杯狀細(xì)胞較模型組大量減少，肺泡間隔輕度增寬。相比起來，地米組的氣道幾乎無炎癥，

7、管腔也未見狹窄，無氣管痙攣，但激素用量較大后導(dǎo)致有的大鼠明顯的彌漫性間質(zhì)性炎，間質(zhì)纖維化，肺不張。清肺飲組，它的病理炎癥表現(xiàn)雖較模型組炎癥有所減輕，但較地米組和清肺飲合百令膠囊組炎癥重，有明顯的氣管痙攣，管腔內(nèi)有較多炎性分泌物，管腔狹窄明顯。 清肺飲合高中低劑量組比較起來，高、中劑量效果均比低劑量效果好，以中劑量更為明顯，氣道炎癥最輕，管腔未見明顯狹窄，支氣管和血管平滑肌可見輕度增生。高劑量組管腔內(nèi)仍見少量炎性細(xì)胞浸潤，少量杯狀

8、細(xì)胞，低劑量組則管壁增厚，上皮見增生水腫，管壁有少量杯狀細(xì)胞，管腔內(nèi)可見較多炎性滲出物，大中氣道和血管周圍可見較多的淋巴細(xì)胞浸潤。 3.肺功能測(cè)定與正常組比較：模型組大鼠肺功能均顯著異常，大鼠呼吸阻力(Ri,Re)、用力肺活量(FVC)明顯升高(P＜0.01)，肺順應(yīng)性(cl)、最大通氣量(MVV)、0.3秒呼出容積(FEV0.3)、0.3秒呼出容積占用力肺活量百分比(EFEV0.3/FVC)、用力呼氣中期流量(FEF25-75

9、％)、用力呼吸峰流量(PEF)顯著降低(P＜0.01)。 與模型組比較：各治療組呼吸阻力均有所下降(P＜0.01)，F(xiàn)EV0.3、EFEV0.3/FVC、PEF均有所升高(P＜0.01)，清肺飲合百令膠囊組肺cl和MVV顯著升高(P＜0.01)，清肺飲合百令膠囊組和地米組FEF25-75％升高(P＜0.01)。 與地米組比較：清肺飲組的呼吸阻力明顯升高(P＜0.01)，吸氣阻力地米組和清肺飲合百令膠囊組無差異(P＞0.0

10、5)；清肺飲組FEV0.3、EFEV0.3/FVC明顯降低(P＜0.01)，清肺飲合百令膠囊組與地米治療組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；cl、MVV、FVC、FEF25-75％、PEF三個(gè)治療組之間無比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 與清肺飲合低劑量組比較：中劑量組和高劑量組Ri、Re明顯降低(P＜0.05)，F(xiàn)EV0.3/FVC顯著升高(P＜0.01)，中劑量組和高劑量組之間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；高劑量組

11、cl顯著升高(P＜0.01)，中劑量組和低劑量組之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；MVV、FVC、FEF25-75％、PEF三組之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 4.細(xì)胞因子的變化與正常組比較，哮喘模型組大鼠IL-4、IL-5、TNF-α含量顯著升高，IFN-γ含量明顯降低(P＜0.01)，IL-4/IFN-γ比例明顯失衡，提示哮喘炎癥存在。與哮喘模型組比較，各治療組炎癥均有減輕，IL-4、IL-5、TNF-α含量顯著

12、下降(P＜0.01)，IFN-γ含量明顯升高(P＜0.01)；與清肺飲合百令膠囊組比較，清肺飲組IL-4、IL-5、TNF-α含量顯著升高，IFN-γ明顯降低(P＜0.01)，地米組除IL-5較清肺飲合百令膠囊組有所下降(P＜0.05)，其余無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。高中低劑量組比較，中、高劑量組較低劑量組IL-4、IL-5、TNF-α含量顯著降低，IFN-γ含量明顯升高(P＜0.01)。 結(jié)論1.在肺組織形態(tài)學(xué)中，清肺飲合百令膠囊組(即中

13、劑量組)能加速緩解支氣管痙攣，減少嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤，減輕氣道炎癥，這為補(bǔ)益肺腎藥有效治療哮喘提供了依據(jù)。 2.補(bǔ)益肺腎法能顯著改善哮喘大鼠肺功能，這可能與其氣道炎癥的減輕相關(guān)。 3.補(bǔ)益肺腎法能顯著改善哮喘患者的細(xì)胞因子指標(biāo)，推測(cè)其可能通過調(diào)節(jié)TH1/TH2的平衡、降低IgE的水平、抑制嗜酸粒細(xì)胞的聚集和活化等環(huán)節(jié)產(chǎn)生作用。 4.在清化痰熱的基礎(chǔ)上加用補(bǔ)益肺腎法在發(fā)作期的確能起到非常明顯的作用，推測(cè)可能