AT1受體拮抗劑Candesartan對(duì)AngⅡ促原代AML細(xì)胞增殖的拮抗作用及機(jī)制.pdf

1、研究背景:
　　 不斷探討急性白血病新的發(fā)病機(jī)制并針對(duì)其機(jī)制進(jìn)行個(gè)體化的靶向治療成為目前急性白血病基礎(chǔ)研究和臨床治療的熱點(diǎn)。近年研究發(fā)現(xiàn)腎素-血管緊張素系統(tǒng)與急性白血病的發(fā)生有關(guān)，Koca E[1]等報(bào)道白血病K562細(xì)胞株表達(dá)腎素、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、血管緊張素原及血管緊張素Ⅱ1型受體(AT1R)和血管緊張素Ⅱ2型受體(AT2R)。2007年Beyazit Y[2]等報(bào)道在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中存在著腎素、血管緊張素

2、轉(zhuǎn)化酶及血管緊張素的過(guò)表達(dá)。Casares MT[3]等研究腎素與急性髓系白血病(AML)的相關(guān)性時(shí)發(fā)現(xiàn)，在腎素陽(yáng)性表達(dá)的AML患者中，化療完全緩解(CR)時(shí)腎素表達(dá)消失，在復(fù)發(fā)時(shí)腎素再次表達(dá);在化療不敏感腎素陽(yáng)性表達(dá)的AML患者中腎素持續(xù)表達(dá)。以上研究均說(shuō)明腎素-血管緊張素系統(tǒng)在急性白血病發(fā)病中可能起重要作用。
　　 進(jìn)一步研究其機(jī)制發(fā)現(xiàn)血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)通過(guò)血管緊張素Ⅱ1型受體途徑促進(jìn)白血病K562細(xì)胞株增殖及促進(jìn)其自

3、分泌VEGF，上調(diào)腫瘤血管新生。有學(xué)者研究報(bào)道AngⅡ經(jīng)其AT1R促進(jìn)胃癌MKN-28細(xì)胞株分泌基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)增加[4]，而基質(zhì)金屬蛋白酶降解基質(zhì)對(duì)血管生成、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移至關(guān)重要[5]，有研究表明MMP-2、MMP-9表達(dá)程度的高低與腫瘤分級(jí)、分期相關(guān)[6]；Ishimatsu S[7]等研究發(fā)現(xiàn)AngⅡ激活A(yù)T1R后通過(guò)PI3K/AKT等信號(hào)途徑增強(qiáng)絨毛膜癌BeWo細(xì)胞株遷移和侵襲

4、。以上研究說(shuō)明AngⅡ經(jīng)其AT1受體促進(jìn)細(xì)胞因子分泌增加及調(diào)節(jié)各種信號(hào)傳導(dǎo)途徑來(lái)調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲；然而AngⅡ是否也通過(guò)激活A(yù)T1R后經(jīng)PI3K/AKT信號(hào)途徑的級(jí)聯(lián)反應(yīng)促進(jìn)白血病細(xì)胞的增殖，目前研究極少見(jiàn)。針對(duì)腎素-血管緊張素系統(tǒng)在急性白血病發(fā)病中起的作用，2009年De la Iglesia[8]報(bào)道使用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑群多普利、AT1受體拮抗劑氯沙坦體外對(duì)白血病細(xì)胞株K562、HL60、U937、 KU812具有抑制細(xì)

5、胞增殖及促進(jìn)其凋亡作用，并證實(shí)其抑制細(xì)胞增殖不依賴于C-myc、bcl-2基因表達(dá)的下降，其促細(xì)胞凋亡作用也不是通過(guò)下調(diào)C-myc、bcl-2、bcl-X基因表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)，其機(jī)制可能與這些藥物阻斷血管緊張素Ⅱ經(jīng)AT1受體激活Smad有關(guān);但AT1受體拮抗劑能否對(duì)原代AML細(xì)胞起作用仍少見(jiàn)報(bào)道。
　　 2009年Kosugi M[6,9，10]等報(bào)道在膀胱癌動(dòng)物模型中顯示AT1受體拮抗劑聯(lián)合紫杉醇、順鉑具有協(xié)同抗腫瘤作用，AT1受體

6、拮抗劑聯(lián)合化療藥是否也能對(duì)原代AML細(xì)胞具有協(xié)同抑制增值作用的研究也少見(jiàn)。
　　 根據(jù)現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)，因此本研究旨在探討AT1R受體拮抗劑Candesartan對(duì)AngⅡ促原代AML細(xì)胞增殖的拮抗作用及機(jī)制，進(jìn)一步觀察聯(lián)合化療藥體外對(duì)白血病抑制增殖情況，為將來(lái)進(jìn)一步可能的臨床聯(lián)合用藥提供依據(jù)。
　　 研究目的:
　　 本研究觀察AngⅡ?qū)υ毙运杓?xì)胞白血病患者白血病細(xì)胞增殖的影響和血管緊張素Ⅱ AT1受體拮抗劑

7、Candesartan能否阻斷這種作用，探討其機(jī)制，進(jìn)一步觀察Candesartan聯(lián)合化療藥體外對(duì)AML細(xì)胞抑制增殖情況，為將來(lái)進(jìn)一步可能的臨床聯(lián)合用藥提供依據(jù)。
　　 對(duì)象與方法:
　　 對(duì)象：32例除M3外成人急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者骨髓標(biāo)本來(lái)自2009年02月至2010年2月我院住院及門診初診AML患者，其中男性18例，女性14例，中位年齡43(11-82)歲。按FAB分型標(biāo)準(zhǔn)，其中M26例，M410例，M

8、515例，M61例，26例非惡性血液病患者正常骨髓像的骨髓為對(duì)照組，男性14例，女性12例。
　　 方法：MTT法分別觀察AngⅡ?qū)υ鶤ML細(xì)胞、正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖的影響；AT1R拮抗劑Candesartan、AT2R拮抗劑PD123319對(duì)AngⅡ促原代AML細(xì)胞增殖的拮抗作用；流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡；Western-blot法檢測(cè)Candesartan、PI3K抑制劑LY294002對(duì)原代AML細(xì)胞AKT磷酸化的影響；

9、Elisa法檢測(cè)Candesartan及PI3K抑制劑LY294002處理前后培養(yǎng)上清液MMP-9水平變化；MTT法觀察Candesartan聯(lián)合柔紅霉素對(duì)原代AML細(xì)胞細(xì)胞增殖抑制率。
　　 結(jié)論:
　　 1.AngⅡ能劑量和時(shí)間依賴性促進(jìn)原代AML細(xì)胞增殖，而對(duì)正常骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖無(wú)此作用。
　　 2.AT1受體拮抗劑Candesartan能劑量和時(shí)間依賴性抑制AngⅡ作用下原代AML細(xì)胞增殖，而AT2受體