PLA-PEG納米粒在載抗腫瘤藥物的應(yīng)用及其PLA-PEG納米粒對(duì)小鼠肝細(xì)胞的生物效應(yīng).pdf

1、目的：拓寬表多柔比星納米粒的制劑學(xué)種類，制備了表多柔比星聚PLA-PEG納米粒?？疾霵LA-PEG納米顆粒作為一種藥物載體與培養(yǎng)細(xì)胞及其器官的生物相溶性。分析小鼠肝臟在注射大劑量空白PLA-PEG納米粒(42.04 mg/kg，i.V.)之后藥物代謝基因表達(dá)譜的變化。分析ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在PLA-PEG納米粒肝臟代謝和細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)中起何種作用。并提出肝細(xì)胞對(duì)PLA-PEG納米粒的向外排泄機(jī)制。 方法：本試驗(yàn)采用均勻設(shè)計(jì)方法設(shè)計(jì)

2、實(shí)驗(yàn)，制備出表多柔比星PLA-PEG納米粒，考察納米粒的形態(tài)學(xué)，理化性質(zhì)，藥學(xué)指標(biāo)。MTT還原法體外測定了PLA-PEG納米粒對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞HepG2生存力的影響。細(xì)胞原位凋亡檢測試驗(yàn)考察大劑量空白PLA-PEG納米粒是否會(huì)對(duì)幾個(gè)重要臟器(肝臟，心臟和腎臟)存在潛在性的損傷作用。SOD、NOS酶活性以及MDA水平檢測考察大劑量PLA-PEG納米顆粒是否影響小鼠肝臟，心臟和腎臟細(xì)胞和血清的抗氧化能力。我們通過小鼠肝細(xì)胞對(duì)PLA-PEG鈉米顆粒

3、的體外攝取和外排泄試驗(yàn)考察肝細(xì)胞對(duì)PLA-PEG納米顆粒的攝取程度及其排泄機(jī)制。我們隨后使用小鼠藥物代謝cDNA芯片和RT-PCR試驗(yàn)檢測了96個(gè)藥物代謝基因的表達(dá)譜。并通過試驗(yàn)組和對(duì)照組樣品間基因轉(zhuǎn)錄的相對(duì)豐度分析，篩選對(duì)PLA-PEG納米顆粒肝臟代謝過程中扮演重要角色的基因。并根據(jù)ATP-結(jié)合盒傳遞蛋白的藥理學(xué)功能及其本試驗(yàn)的結(jié)果，提出肝細(xì)胞向外排泄細(xì)胞內(nèi)PLA-PEG納米顆粒的機(jī)制模型。 結(jié)果：本試驗(yàn)制備出表多柔比星PLA

4、-PEG納米粒。得到的載藥納米粒平均粒徑為174.5nm，包封率為90.42﹪，載藥率為8.22﹪。試驗(yàn)結(jié)果證明以PLA-PEG為載體材料，以溶劑揮發(fā)法制備表多柔比星PLA-PEG納米粒的工藝是可行的。MTT還原法結(jié)果表明與未加納米顆粒的對(duì)照組相比，在0.0010-0.1mg/ml納米顆粒使用濃度范圍內(nèi)，HepG2細(xì)胞在與納米顆粒共同培養(yǎng)24h之后，納米粒對(duì)細(xì)胞活力的影響與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同時(shí)，細(xì)胞凋亡檢測證實(shí)，

5、昆明小鼠在注射大劑量(42.04 mg/kg，i.v.)空白PLA-PEG納米顆粒之后，納米顆粒不會(huì)誘導(dǎo)肝臟、腎臟及心臟細(xì)胞的凋亡，大劑量PLA-PEG納米顆粒對(duì)肝細(xì)胞不存在著潛在性的損傷作用。與未注射納米顆粒的對(duì)照組相比，在大劑量作用的幾個(gè)組織(肝，心，腎)和血清樣品中，SOD、NOS酶活性以及MDA水平與空白對(duì)照組比較均沒有出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異(P<0.05)，大劑量PLA-PEG納米顆粒不會(huì)影響小鼠肝細(xì)胞的抗氧化能力。體外小鼠肝

6、細(xì)胞對(duì)PLA-PEG納米顆粒的攝取試驗(yàn)結(jié)果表明該種細(xì)胞對(duì)PLA-PEG納米顆粒的攝取在750μg/ml到1000μg/ml的濃度范圍之內(nèi)會(huì)達(dá)到飽和吸收，體外小鼠肝細(xì)胞對(duì)PLA-PEG納米顆粒的外排試驗(yàn)表明大約51﹪-52﹪(51.5﹪和52.0﹪)被小鼠肝細(xì)胞攝取的PLA-PEG納米顆粒會(huì)被肝細(xì)胞外排。小鼠藥物代謝cDNA芯片分析和RT-PCR檢測結(jié)果表明與空白對(duì)照組(注射生理鹽水)相比，在注射大劑量納米顆粒(42.04 mg/kg，i

7、.V.)的昆明小鼠的肝細(xì)胞內(nèi)，出現(xiàn)了許多ATP-結(jié)合盒傳遞蛋白(ABCA8，ABCD3，ABCD4和ABCA5)表達(dá)的上調(diào)和GSTP1的下調(diào)，特別是ABCA8和ABCC5的表達(dá)上調(diào)尤為突出。 結(jié)論：以PLA-PEG為載體材料，以溶劑揮發(fā)法制備表多柔比星PLA-PEG納米粒藥物工藝是可行的。PLA-PEG作為一種抗癌藥物載體，應(yīng)用于體內(nèi)具有很好的生物相溶性。但是小鼠肝細(xì)胞對(duì)PLA-PEG納米顆粒的吸收能力是有限的，小鼠肝細(xì)胞對(duì)PL

8、A-PEG-納米顆粒的吸收在達(dá)到飽和之后會(huì)外排一定比率的納米顆粒。我們根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果及其前人的研究成果提出兩個(gè)細(xì)胞外排泄細(xì)胞內(nèi)PLA-PEG納米顆粒的模型，模型一：我們認(rèn)為這些ATP結(jié)合盒運(yùn)載體，特別是ABCA8在小鼠肝細(xì)胞外排PLA-PEG納米顆粒水解之后的低聚物過程中扮演了重要的角色。模型二：我們認(rèn)為ABCC5表達(dá)多藥耐藥蛋白質(zhì)5(MDR5)參與向外運(yùn)輸PLA-PEG納米粒與GSH的共軛物GSX的過程。大劑量注射PLA-PEG納米顆粒