核仁磷酸蛋白突變對白血病細胞生物學特性的影響及機制初探.pdf

1、急性髓系白血病(AML)是一類造血系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病急驟，病程短，死亡率較高。傳統(tǒng)的放化療治療AML完全緩解率較低，易復發(fā)。雖然造血干細胞移植是根治AML的方法，但是存在著排異反應、治療費用昂貴等諸多問題。臨床資料顯示，在成人和兒童AML患者中，NPM突變均有發(fā)生，其發(fā)生率隨著年齡的增長而增加。最近發(fā)現(xiàn)，NPM突變能夠促進正常小鼠成纖維細胞MH3T3惡性轉化，但是其對白血病細胞生物學特性的影響還未見文獻報道。 本研究采用基因轉

2、染技術，以NPM無突變的CD34+白血病細胞系KG-1a為研究對象，分析突變型NPM對早期白血病細胞增殖和凋亡的影響及其分子機制。主要的結果和結論如下： 1.檢測KG-1a細胞中CD34抗原和突變型NPM基因的表達。首先利用流式細胞儀(FACS)檢測KG-1a細胞中CD34+細胞含量，發(fā)現(xiàn)KG-1a細胞系中CD34+細胞比例占96.3％。然后利用RT-PCR和免疫組化分別檢測突變型NPM基因表達及其蛋白的亞細胞分布，證實了KG-

3、1a細胞是高表達CD34的早期白血病細胞，不表達突變型NPM基因和蛋白，符合后續(xù)實驗的要求。 2.轉染突變型NPM基因，觀察其對白血病細胞增殖和凋亡的影響。首先在通過脂質體介導下將突變型NPM基因轉染入KG-1a細胞并篩選穩(wěn)定表達株。RT-PCR和免疫組化檢測突變NPM基因和蛋白表達情況，證明轉染后白血病細胞表達突變型NPM基因和蛋白；其次采用FACS檢測細胞周期，發(fā)現(xiàn)轉染組細胞周期進程明顯增快，同時臺盼藍染色計數活細胞，顯示細

4、胞增殖能力增強；最后采用分光光度方法檢測細胞casepase-3的活性以判斷細胞凋亡情況，結果顯示轉染組細胞casepase-3的活性下降，細胞凋亡減少。上述實驗表明了突變型NPM不僅能夠促進細胞周期進程，促進細胞體外增殖，而且還賦予細胞抗凋亡的性質。 3.初步探討突變型NPM影響白血病細胞生物學特性的分子機制。首先利用RT-PCR檢測細胞周期調節(jié)因子p21 mRNA水平，發(fā)現(xiàn)轉染組細胞p21的mRNA表達減低；然后檢測細胞ca