耐門冬酰胺酶的急性T淋巴細胞白血病細胞生物學特性研究.pdf

1、研究背景
　　 目前，盡管急性淋巴細胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia;ALL)的預后得到很大的改善。然而，由于化療耐藥因素的存在導致許多患者難以獲得緩解或最終復發(fā)。近來，隨著對腫瘤干細胞(cancer stem cell;CSC)研究的深入，越來越多的研究認為腫瘤的復發(fā)和轉移，其罪魁禍首是由于CSC的存在，而人們在進行“CSC”生物學特性研究中發(fā)現(xiàn)，多藥耐藥性是CSC的重要特性之一。而耐藥的AL

2、L細胞中是否同樣存在CSC?本研究中應用治療ALL的常用化療藥物門冬酰胺酶(L-asparaginase;L-asp)誘導T-ALL細胞Jurkat對其耐藥，建立耐藥細胞系。應用實時定量PCR法、流式細胞學法檢測耐藥ALL細胞系的CSC相關基因的表達情況、細胞表面抗體表達變化情況、側群細胞(sidepopulation;SP)含量，進一步研究耐藥ALL細胞系的生物學特性，進而了解ALL多藥耐藥的機制以及多藥耐藥和CSC之間的關系，從而為

3、自血病的靶向治療和耐藥逆轉等提供實驗依據。
　　 目的
　　 探討耐門冬酰胺酶的急性T淋巴細胞白血病細胞的生物學特性。
　　 方法：
　　 1.本實驗以人T-ALL細胞株Jurkat為親本細胞，經過L-asp逐步增量誘導Jurkat細胞耐藥，建立耐L-asp的急性T淋巴細胞白血病細胞株。觀察其形態(tài)學特征及生長特性，MTT比色法分析耐藥細胞系的耐藥圖譜和耐藥指數。
　　 2.分別收集Jurkat和耐

4、L-asp的Jurkat細胞，用流式細胞學方法檢測析。Jurkat細胞耐藥前后的細胞膜表面標志的變化情況。
　　 3.Jurkat和耐藥Jurkat細胞Hoechst33342染色后，對比維拉帕米抑制試驗，應用流式細胞學法檢測SP細胞含量。
　　 4.用實時定量PCR法分析Jurkat細胞和Jurkat/L-asp細胞中ABCG2、Sox-2、Oct-4、Nanog基因的表達情況。
　　 結果：
　　 1

5、.成功建立了能夠在0.5u/ml的L-asp培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長的耐藥細胞株，命名為Jurkat/L-asp。
　　 2.MTT比色法分析了其耐藥圖譜，結果顯示：Jurkat/L-asp對柔紅霉素、依托泊苷、甲氨蝶呤、阿糖胞苷耐藥指數是Jurkat的15.5、9.59、4.28、4.98倍。
　　 3.實時定量PCR擴增結果顯示人急性淋巴細胞白血病細胞系Jurkat/L-asp較Jurkat細胞高表達ABCG2、Sox-2基

6、因，前者較后者有顯著的統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。而Oct-4、Nanog基因在Jurkat/L-asp細胞和Jurkat細胞中的表達無明顯統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 4.Jurkat/L-asp細胞較Jurkat細胞高表達CD34和CD13，前者較后者有顯著的統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。對數生長期的耐藥T-ALL細胞系Jurkat/L-asp細胞用Hoechst33342染色，對比維拉帕米抑制試驗，在流式細胞儀上檢測兩