痹腫消湯及拆方對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜ERK1-2、ERK5表達(dá)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的:通過檢測清熱祛濕活血的經(jīng)驗(yàn)方——痹腫消湯全方及拆方（按濕、熱、毒、瘀拆方）對膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5(ERK5)的表達(dá)及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，探討從濕、熱、毒、瘀論治活動(dòng)期RA的分子機(jī)理，闡釋RA活動(dòng)期濕熱毒瘀的病機(jī)。
　　 方法:采用在SD大鼠后足底、尾根部、背部部位皮下注射牛Ⅱ型膠原蛋白與完全弗氏佐劑的方法誘導(dǎo)SD大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎（CIA）模型，并隨機(jī)分

2、組為模型組、痹腫消湯組、清熱解毒組（拆方1組）、祛濕通絡(luò)組（拆方2組）、活血組（拆方3組）等5個(gè)組，設(shè)立正常組為對照組。動(dòng)態(tài)觀察SD大鼠一般情況、體重增長數(shù)、關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分、關(guān)節(jié)腫脹度及關(guān)節(jié)滑膜組織病理學(xué)改變。采用免疫印跡法(Western blot)同步檢測正常組、模型組、痹腫消湯組、拆方1組、拆方2組、拆方3組各組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)滑膜ERK1/2、ERK5的磷酸化水平，運(yùn)用灰度掃描軟件對結(jié)果進(jìn)行半定量分析。
　　 結(jié)果:造模

3、后14d，模型組滑膜ERK1/2、ERK5表達(dá)高于正常組(P＜0.05)，造模后21、28d，隨著免疫時(shí)間的延長，關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分增加，模型組ERK1/2、ERK5表達(dá)逐漸增加(P＜0.05)。痹腫消湯組、拆方1組、拆方2組、拆方3組治療后，于21d、28d的ERK1/2、ERK5磷酸化表達(dá)水平均低于同期模型組(P＜0.05)，且隨著免疫時(shí)間延長，關(guān)節(jié)炎指數(shù)積分降低，ERK1/2、ERK5的表達(dá)水平逐漸減低(P＜0.05)。其中痹腫消湯組

4、的ERK1/2、ERK5各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平均顯著低于同期拆方1組、拆方2組、拆方3組(P＜0.05)，拆方2組下調(diào)ERK1/2表達(dá)較拆方1組、拆方3組更顯著(P＜0.05)。而拆方1組下調(diào)ERK5表達(dá)較拆方2組、拆方3組更顯著(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:在CIA病理過程中，隨著關(guān)節(jié)炎癥狀加重，ERK1/2、ERK5的磷酸化水平逐漸上調(diào)，提示ERK1/2、ERK5與RA滑膜細(xì)胞增殖和骨質(zhì)侵蝕等病變密切相關(guān)。痹腫消湯及其拆方各組

5、都能下調(diào)CIA大鼠滑膜ERK1/2、ERK5的磷酸化水平，提示痹腫消湯及其各拆方均能通過抑制ERK1/2、ERK5信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，達(dá)到阻抑RA關(guān)節(jié)滑膜增殖和骨質(zhì)侵蝕的作用。痹腫消湯組抑制ERK1/2、ERK5信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化的作用最顯著，提示濕、熱、毒、瘀復(fù)合病機(jī)是RA活動(dòng)期的主要中醫(yī)病機(jī)，體現(xiàn)了中醫(yī)藥治療多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、整體調(diào)節(jié)的效用優(yōu)勢，也顯示了從濕、熱、毒、瘀論治活動(dòng)期RA是合理的治療方法。而祛濕通絡(luò)組抑制ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)