痹痛靈顆粒對膠原誘導關節(jié)炎關節(jié)滑膜及肺部病變血管新生影響的研究.pdf

1、目的:從中醫(yī)整體觀念出發(fā),按照中醫(yī)痹癥皮痹不已,復感于邪,內(nèi)舍于肺,肢體痹與肺痹相關之理論,觀察痹痛靈顆粒對膠原誘導關節(jié)炎關節(jié)滑膜與肺部病變血管新生的影響作用,為臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　 方法:1.在目前公認的Ⅱ型膠原關節(jié)炎(CIA)模型基礎上,使用博來霉素致間質(zhì)性肺疾病(ILD),探索改進建立大鼠Ⅱ型膠原誘導的關節(jié)炎伴博來霉素致間質(zhì)性肺疾病復合模型(CIA-ILD)。
　　 2.肉眼觀察各組大鼠的整體狀態(tài),活動行為

2、,關節(jié)腫脹程度,呼吸狀況。
　　 3.參照文獻方法評定關節(jié)炎分數(shù)(AI)。
　　 4.用排水法測量雙后足部體積變化。
　　 5.常規(guī)HE染色,觀察各組大鼠關節(jié)滑膜和肺組織病理變化,并進行評分。
　　 6.采用FⅧ因子(factorⅧrelatedantigen)抗體免疫組化標記,觀察各組關節(jié)滑膜和肺組織微血管密度(MVD)變化。
　　 7.采用實時熒光定量PCR(Real-TimePCR,RT-P

3、CR)檢測方法,觀察痹痛靈顆粒對各組關節(jié)滑膜組織和肺組織IL-17mRNA、IL-1βmRNA、TNF-αmRNA、VEGFmRNA基因表達的影響。
　　 8.資料數(shù)據(jù)以-x±s表示,應用2-△△Ct法分析real-timePCR數(shù)據(jù),當目的基因表達≥2倍,認為該基因表達增高,若≤0.5倍認為基因表達降低。其余數(shù)據(jù)應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析,各組間比較采用方差分析,以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:1.C

4、IA-ILD實驗模型組大鼠整體狀態(tài)飲水、進食量、皮毛光澤、活動行為較正常組減少:關節(jié)腫脹、呼吸較正常組加快。模型組大鼠雙足部體積比較與關節(jié)炎評分造模第21天較造模第7天有顯著增加(P＜0.05)。模型組造模第7天滑膜間皮增厚,炎性浸潤細胞;造模14天滑膜間皮增厚,炎性浸潤細胞加重;造模第21天滑膜間皮增厚,炎性浸潤細胞更為加重。關節(jié)滑膜病變程度病理評分造模第21天較造模第7天有顯著增加(P＜0.05)。模型組于造模第七天肺泡壁出現(xiàn)輕中度

5、增厚,間質(zhì)淋巴細胞漿細胞炎性細胞浸潤,局部出血,造模第14天肺泡壁重度增厚,間質(zhì)淋巴細胞漿細胞浸潤,造模第21天時肺組織可見大量炎細胞浸潤呈斑片狀分布,在支氣管周圍病變尤為明顯。肺泡間隔增寬充血,局部肺泡上皮細胞增生,部分肺泡內(nèi)可見巨噬細胞簇集成團,纖維母細胞及纖維細胞增生,肺泡炎肺纖維化程度比較造模第21天較造模第7天有顯著增加(P＜0.05)。組織病理學第7天,第14天,第21天觀察發(fā)現(xiàn),關節(jié)滑膜和肺部病變出現(xiàn)和進展,造模成功。

6、r>　　 2.實驗模型組大鼠關節(jié)炎腫脹明顯,各給藥組關節(jié)腫脹度都有不同程度減輕,關節(jié)炎評分均低于模型組,以痹痛靈高、中劑量組和雷公藤多苷組效果較為顯著(P＜0.05)。模型組關節(jié)滑膜病理組織評分增高,滑膜組織滑膜細胞增生,多層以上,排列疏散、紊亂,炎性細胞浸潤、聚集。痹痛靈高劑量組、痹痛靈中劑量組,雷公藤多苷組病理改善明顯,痹痛靈低劑量組有所改善。模型組肺組織可見炎細胞浸潤,肺泡間隔增寬充血可見肺泡內(nèi)出血,出現(xiàn)纖維化表現(xiàn)。痹痛靈高劑量

7、組、痹痛靈中劑量組,雷公藤多苷組病理改善明顯(P＜0.05),痹痛靈低劑量組有所改善。
　　 3.實驗模型組大鼠關節(jié)滑膜組織和肺組織MVD的數(shù)量相對正常組增高,痹痛靈高中低劑量組及雷公藤多苷組大鼠關節(jié)滑膜組織和肺組織MVD的數(shù)量較模型組減少(P＜0.05)。
　　 4.實驗模型組比正常組IL-17mRNA在關節(jié)滑膜中表達≥2倍,基因表達在大鼠關節(jié)滑膜組織和肺組織增高。痹痛靈高中劑量組比模型組IL-17mRNA在關節(jié)滑膜中

8、表達≤1/2倍,基因表達降低。雷公藤多苷組比模型組IL-17mRNA在關節(jié)滑膜中表達倍≤1/2,基因表達降低。模型組大鼠肺組織中IL-17mRNA表達比正常組≥2倍,基因表達增高。痹痛靈高劑量組大鼠肺組織中IL-17mRNA表達比模型組≤1/2倍,基因表達降低。雷公藤多苷組大鼠肺組織中IL-17mRNA表達比模型組≤1/2倍,基因表達降低。
　　 5.實驗模型組大鼠關節(jié)滑膜組織IL-1βmRNA中表達比正常組≥2倍,基因表達增高

9、。痹痛靈高劑量組及雷公藤多苷組大鼠關節(jié)滑膜組織IL-1βmRNA表達比模型組≤1/2倍,基因表達下調(diào)。模型組大鼠肺組織IL-1βmRMA表達比正常組≥2倍,基因表達增高,痹痛靈高劑量組及雷公藤多苷組大鼠肺組織IL-1βmRNA表達比模型組≤1/2倍,基因表達下調(diào)。
　　 6.實驗模型組大鼠關節(jié)滑膜組織和肺組織TNF-αmRNA表達比正常組≥2倍,基因表達增高。痹痛靈高中劑量組及雷公藤多苷組使大鼠關節(jié)滑膜組織TNF-αmRNA表達

10、比模型組≤1/2倍,基因表達下調(diào)。模型組大鼠肺組織TNF-αmRNA基因表達量相對正常組增高,痹痛靈高中劑量組及雷公藤多苷組大鼠肺組織TNF-αmRNA比模型組≤1/2倍,基因表達下調(diào)。
　　 7.實驗模型組大鼠關節(jié)滑膜組織VEGFmRNA表達相對正常組≥2倍,基因表達增高。痹痛靈高劑量組大鼠關節(jié)滑膜組織VEGFmRNA比模型組≤1/2倍,基因表達下調(diào)。模型組大鼠肺組織VEGFmRNA相對正常組≥2倍,基因表達增高,痹痛靈高中劑

11、量組肺組織VEGFmRNA較模型組≤1/2倍,基因表達下調(diào)。雷公藤多苷組大鼠肺組織中VEGFmRNA較模型組≤1/2倍,基因表達降低。
　　 結(jié)論:1.為探討痹痛靈顆粒對類風濕關節(jié)炎關節(jié)和肺部病變的影響,首次進行了CIA-ILD的建模工作。組織病理學第7天,第14天,第21天關節(jié)滑膜和肺部病變出現(xiàn)和進展。
　　 2.痹痛靈顆粒對痹癥類風濕關節(jié)炎實驗模型CIA-ILD大鼠關節(jié)滑膜和肺組織兩個部位炎性病理變化有著抑制作用,高