骨誘導(dǎo)活性多肽明膠微球制備和體外釋藥性及成骨能力研究.pdf

1、本研究包括兩部分：
　　 第一部分：骨誘導(dǎo)活性多肽明膠微球制備工藝優(yōu)化和體外釋藥性研究
　　 目的:制備用于骨誘導(dǎo)的多肽明膠微球，并研究其體外緩釋效果。
　　 方法:用乳化交聯(lián)法制備多肽明膠微球。通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出4個(gè)主要影響微球粒徑大小和載藥量的因素，即明膠濃度(A)、攪拌速度(B)、投料比(C)、W/O體積比(D)。每個(gè)因素設(shè)計(jì)3個(gè)水平，按L9(34)正交表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，尋找最佳條件。采用顯微計(jì)數(shù)法測(cè)定微球粒徑，用

2、掃描電鏡觀察微球外觀、大小、形狀等表面形態(tài)，利用紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)微球載藥量和包封率及建立多肽微球體外釋藥曲線。
　　 結(jié)果:制備微球的最佳組合為A2B1C2D3，即明膠溶液濃度25％，攪拌速度為400r/min，投料比1:15，W/O為1:15，其對(duì)微球載藥量的影響次序?yàn)橥读媳龋久髂z溶液濃度＞W(wǎng)/O＞攪拌速度。多肽微球形態(tài)較好，平均粒徑為86.41μm，粒徑范圍在78.6～97.2um微球占總數(shù)的80％以上。多肽微球的載藥量

3、為5.42[％]，包封率85.83[％]，溶脹率71.3[％]。多肽明膠微球釋藥符合雙相動(dòng)力學(xué)釋藥規(guī)律，初相為快速釋藥相，后相為緩釋相，在24h時(shí)，累積釋藥率達(dá)30.5[％]，84[％]左右的BMP-2活性肽在24d釋放出來(lái)。
　　 結(jié)論:正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法有助于選擇更加合適的制備條件，多肽明膠微球的制備工藝簡(jiǎn)單可行，成球性好，具有良好的緩釋效果。
　　 第二部分：骨誘導(dǎo)活性多肽明膠微球?qū)Υ笫驜MSC粘附、增殖和誘導(dǎo)成骨分

4、化的研究
　　 目的:探討其具有骨誘導(dǎo)性多肽明膠微球?qū)Υ笫蠊撬杌|(zhì)干細(xì)胞(BMSC)向成骨方向定向誘導(dǎo)成骨分化的能力；評(píng)價(jià)多肽明膠微球?qū)Υ笫蠊撬杌|(zhì)干細(xì)胞(BMSC)的粘附、增殖及誘導(dǎo)成骨分化的影響。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)分四組，對(duì)照組(A)、空白明膠微球組(B)、多肽組?、多肽明膠微球組(D)。取4周的SD大鼠分離培養(yǎng)BMSCs,傳至第3代時(shí)：A組：仍采用DMEM完全培養(yǎng)基；B組：改用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(DMEM完全培養(yǎng)基+空

5、白明膠微球)；C組：改用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(DMEM完全培養(yǎng)基+P24多肽)；D組：改用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基(DMEM完全培養(yǎng)基+P24多肽明膠微球)。繼續(xù)培養(yǎng)2～4周，流式細(xì)胞儀(FCM)鑒定培養(yǎng)細(xì)胞性質(zhì)，細(xì)胞計(jì)數(shù)得出細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，檢測(cè)堿性磷酸酶(ALP)活性以了解BMSC成骨分化情況。
　　 結(jié)果:培養(yǎng)細(xì)胞為BMSC。A、B、C三組細(xì)胞的數(shù)量隨時(shí)間逐步提高，均在10 d左右達(dá)到峰值，隨后進(jìn)入平臺(tái)期，而D組細(xì)胞數(shù)量10d后仍呈上升狀態(tài)，