聯(lián)合TLR2mab和TLR4mab對同種心臟移植免疫排斥反應(yīng)的影響.pdf

1、目的：在大鼠同種心臟腹腔異位移植模型中，使用TLR2單克隆抗體(Tolllikereceptor2monoclonalantibodies，TLR2mab)聯(lián)合TLR4單克隆抗體(Tolllikereceptor4monoclonalantibodies，TLR4mab)預(yù)處理受體大鼠，研究TLR2mab聯(lián)合TLR4mab對受體自身免疫調(diào)節(jié)以及其對同種異體移植免疫排斥反應(yīng)的影響，探索其誘導(dǎo)受體大鼠產(chǎn)生免疫耐受的可能，進(jìn)而揭示其部分機(jī)理。

2、
　　 方法：將供體Wistar大鼠及受體SD大鼠隨機(jī)分成四組，A組（空白組）：僅行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異位心臟移植；B組(TLR2mab組)：術(shù)前一天受體SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR2mab，行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異位心臟移植，手術(shù)成功后以每兩天100ug/kg腹腔注射維持；C組(TLR4mab組)：術(shù)前一天受體SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR4mab，行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異

3、位心臟移植，手術(shù)成功后以每兩天100ug/kg腹腔注射維持；D組（TLR2mab聯(lián)合TLR4mab處理組）：術(shù)前一天受體SD大鼠按100ug/kg腹腔注射TLR2mab和TLR4mab，行Wistar大鼠到SD大鼠腹腔異位心臟移植，手術(shù)成功后以每兩天100ug/kg腹腔注射維持。觀測指標(biāo)：移植心臟的存活時(shí)間、病理改變；移植術(shù)后第7天抽取受體SD大鼠外周血，流式細(xì)胞儀檢測各組受體外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞比例及Foxp3蛋白表

4、達(dá)檢測結(jié)果；ELISA法檢測移植后受體外周血中TNF-α、IFN-Υ、IL-6、IL-2、IL-10、TGF-β1變化，以及半定量PCR和熒光定量real-timePCR檢測外周血單個(gè)核細(xì)胞中NF-κB、MYD88、IRF1的mRNA表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：(1)供心平均存活時(shí)間(MST):A組：7.8±0.84天，B組：25.8±2.48天，C組：24.8±2.15天，D組32.6±3.26天。D組供心平均存活時(shí)間較A、B、C

5、組明顯延長，P＜0.05；且B、C組與A組比較，P＜0.05。(2)受體外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞及Foxp3蛋白表達(dá)檢測結(jié)果：A組：2.5±0.47％,42.68±5.47%；B:7.98±1.33%，63.12±5.14%;C:8.98±1.48%,67.54±4.37%;D:19.08±1.46%,82.02±4.61%。D組中CD4+CD25+Treg細(xì)胞及Foxp3蛋白表達(dá)均明顯高于A、B、C組，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)差異；B、C組與A組比較，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)外周血TNF-α(pg/ml):A組：538.59±13.7；B組：271.19±44.07；C組：268.77±29.06；D組：157.18±26.77。D組TNF-α表達(dá)量較A、B、C三組明顯降低，P＜0.05；B、C組與A組相比，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)外周血IFN-Υ(pg/ml)：A組：527.67±62.13；B組：176.83±17.35；C組：15

7、4.25±18.44；D組：104.99±14.39。D組IFN-Υ表達(dá)量較A、B、C三組明顯降低，P＜0.05；B、C組與A組相比，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)外周IL-6(pg/ml):A:302.21±20.76；B:113.59±15.07；C:100.07±13.98；D:64.75±11.21。D組IL-6表達(dá)量較A、B、C三組明顯降低，P＜0.05；B、C組與A組相比，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(6)外周血IL-2

8、（pg/ml）：A組：5.87±0.22；B組：2.94±0.13；C組：3.6±0.14；D組：2.11±0.14；D組IL-2表達(dá)量較A、B、C組明顯降低，P＜0.05；B、C組與A組相比，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(7)外周血IL-10(pg/ml)：A組：23.91±3.51；B組43.46±4.25；C組35.75±5.68；D組63.31±4.53。D組IL-10表達(dá)量較A、B、C組增加，P＜0.05；B、C組與A組相比，

9、P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(8)外周血TGF-β1(pg/ml)：A組：120.74±7.05；B組：164.91±14.25；C組：169.6±10.38；D組：201.36±12.36。D組TGF-β1表達(dá)量較A、B、C組明顯升高，P＜0.05；B、C組與A組相比，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(9)受體外周血單核細(xì)胞中NF—κB、MYD88、IRF1的mRNA表達(dá)情況。D組單核細(xì)胞中NF-κB、MYD88、IRF1的mRNA表達(dá)情

10、況與A、B、C組相比，明顯降低，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：(1)應(yīng)用TLR2mab和TLR4mab預(yù)處理受體大鼠，可以通過阻斷TLR2/4-Myd88-NF-κB和TLR2/4-Myd88-IFR1路徑，減輕移植后急性排斥反應(yīng)。(2)在大鼠同種異體異位腹腔心臟移植模型中我們可以觀察到，TLR2mab和TLR4mab聯(lián)合預(yù)處理受體大鼠，與單用TLR2mab或TLR4mab預(yù)處理受體大鼠相比，可明顯延長心臟移植物的存