柴胡黃芩配伍應用對小鼠急性癲癇模型的影響.pdf

1、目的與意義:
　　 癲癇是一類由多種原因所導致的腦部神經(jīng)元的高度同步化異常放電而引起的以短暫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為表現(xiàn)特征的臨床綜合征。根據(jù)病因的不同，癲癇一般分為兩大類:既原發(fā)性癲癇和繼發(fā)性癲癇。癲癇最為突出的臨床特點是:反復發(fā)作，每次發(fā)作的不可預知以及需要長期的藥物治療。癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)最常見的疾病之一，是目前國內外神經(jīng)科僅次于腦血管病及癡呆的第三大常見疾病。據(jù)流行病學資料統(tǒng)計，全世界約有5000萬人口受到這種疾病的影響，近

2、年我國的流行病學研究表明，有約900萬癲癇患者，各地癲癇患病率在3.6‰-7.0‰不等。在我國廣大農村地區(qū)，癲癇的患病率約為4.7‰-8.5‰，與全世界總體患病率基本相等，其中，約70％-80％癲癇患者未接受治療或治療不規(guī)范，死亡率約為7.9/10萬。由此可見，我國的癲癇患病率接近于發(fā)達國家，但死亡率卻遠高于世界水平，針對這一社會現(xiàn)象必須給予足夠的重視。一直以來，癲癇患者同正常人群相較，都被認為會有更大的形成認知及行為障礙的概率。雖然存

3、在明顯的個體差異，但每個癲癇患者仍舊都會有認知能力受損害的風險。在癲癇發(fā)作頻率高的患者中，認知功能和行為能力的損傷就會不斷積累，從而使其語言能力、學習記憶力、注意力、定向力、行為以及情緒等均產生了不同程度的變化。
　　 目前，國內外治療癲癇的標準是應用抗癲癇藥物，而應用抗癲癇藥物需要達到的目標即是消除癲癇發(fā)作，但是對引起癲癇的病理改變卻無影響，且也不能阻斷癲癇的進程。盡管目前抗癲癇藥物的研究取得了很多進展，各種不同的新型抗癲癇藥

4、物不斷問世，可是仍然有約1/3的癲癇病患者對藥物的治療不敏感。并且長期的癲癇發(fā)作和不間斷的服用藥物不但給患者家庭及社會帶來相當大的經(jīng)濟負擔。幾乎所有的抗癲癇藥物都有不止一種副作用，且差不多全部抗癲癇藥物都有損害認知功能的可能性。同時又由于手術適應癥的局限性、手術對顱腦功能的損害及昂貴的治療費用等一系列相關因素，大大限制了外科手術治療的應用。
　　 癲癇屬中醫(yī)“癇病”范疇，是一種發(fā)作性神志異常的疾病。因氣機逆亂，元神失控而致精神恍

5、惚，甚則突然仆倒，昏不知人等，移時蘇醒后如常人的一類病癥。中醫(yī)中癲癇的病因病機與“痰”密不可分，亦與“肝”息息相關。既往研究表明，中醫(yī)治療癲癇有著悠久的歷史，并且對現(xiàn)代醫(yī)學及后人有著深遠的影響。眾多經(jīng)方中的方劑對現(xiàn)代研究仍具有重要的指導意義，與此同時中醫(yī)治療癲癇也在與時俱進的發(fā)展。并且中藥相對于西藥而言，有毒副作用小及價格低廉等優(yōu)勢。癲癇“從肝論治”歷史綿長，當代癲癇“從肝論治”多沿用《傷寒論》諸柴胡方加減。
　　 最大電休克模

6、型(MES)、戊四氮(PTZ)驚厥模型、士的寧(STR)驚厥模型及匹羅卡品(PLCP)驚厥模型是應用最多的癲癇發(fā)作模型?？梢砸种埔陨纤姆N動物模型驚厥發(fā)作的藥物，可能對控制臨床癲癇的發(fā)作有效。
　　 本課題組前期研究表明:柴胡皂苷a在戊四氮、匹羅卡品、最大電休克所致動物癲癇中，有抗驚厥作用。另有研究顯示:黃芩在匹羅卡品所致癲癇模型有抗驚厥及神經(jīng)保護作用。藥對是方劑中最基本的組成形式，在中醫(yī)源遠流長的發(fā)展長河中，有著悠久的歷史，經(jīng)方

7、中眾多經(jīng)典藥對沿用至今?，F(xiàn)代對于中藥藥對的臨床研究、理論研究、實驗研究均有不同程度的進步和發(fā)展。藥對經(jīng)過配伍后，并不是做了一個簡單的成分之間的加法，通常隨之發(fā)生的是繁復的化學及物理變化，其中的化學成分就隨之產生了變化。同時亦有研究表明，藥對配伍可提高藥物溶解度、提高藥物靶向性、有藥動學行為改變。
　　 張仲景以柴胡黃芩藥對為基本組成，治療黃疸、肝郁氣滯所致的痞積腫塊等多種病證，療效顯著。《本草綱目》:“柴胡行手足少陽，以黃芩為佐

8、?！薄侗静菔鲢^元》云柴胡“宣暢血脈，佐以黃芩為妙”。本課題組提倡癲癇“從肝論治”，自擬中藥復方柴胡疏肝湯，在臨床上取得了滿意的治療效果。柴胡為方中君藥，臣以黃芩共奏和解少陽，疏理肝膽之功，又可疏暢氣機與養(yǎng)肝柔肝相結合。故本研究建立了最大電休克、戊四氮、士的寧、匹羅卡品四個小鼠急性癲癇模型，擬進一步探討柴胡黃芩配伍應用的抗癲癇作用。
　　 方法與內容:
　　 1最大電休克癲癇小鼠造模及處理
　　 使用YSD-4G藥

9、理生理實驗多用儀篩選符合要求的小鼠，齒狀夾以生理鹽水浸濕后，夾住小鼠兩耳尖部，進行交流電刺激，主要刺激參數(shù)為100V，2Hz（預實驗結果），單次刺激方式，以后肢強直性伸直為驚厥指標，篩選符合條件的小鼠60只，隨機分為6組，每組均為灌胃給藥，灌胃前空腹8小時，A組（模型組）予等體積生理鹽水，B組按柴胡黃芩5∶2給藥，其中柴胡濃度為0.3g/ml，C組按柴胡黃芩1∶1給藥，其中柴胡濃度為0.21g/ml，D組（柴胡組）、E組（黃芩組）濃度均

10、為0.42g/ml，F(xiàn)組（地西泮組）濃度為0.4g/ml。末次給藥1h后再行上述電刺激，記錄驚厥數(shù)和強直持續(xù)的時間，計算驚厥率。
　　 2戊四氮急性癲癇小鼠造模及處理
　　 選取SPF級昆明小鼠60只，分組及給藥方法同MES癲癇小鼠，在末次給藥1h后，各組予戊四氮85mg/kg腹腔注射，立即觀察小鼠的癇性發(fā)作30min，小鼠癇性發(fā)作分級采用Racine標準。記錄小鼠癇性發(fā)作的潛伏期，包括陣發(fā)性痙攣潛伏期（即從注射戊四氮開

11、始至相當于1-3級發(fā)作的時間）、強直性驚厥潛伏期（即從注射戊四氮開始至相當于5級發(fā)作的時間）、死亡潛伏期。
　　 3士的寧急性驚厥小鼠造模及處理
　　 選取SPF級昆明小鼠60只，分組及給藥方法同MES癲癇小鼠，在末次給藥1h后，各組予士的寧2mg/kg腹腔注射，立即觀察小鼠的癇性發(fā)作15min，記錄小鼠發(fā)生發(fā)作性陣攣潛伏期、死亡潛伏期。
　　 4匹羅卡品急性驚厥小鼠造模及處理
　　 選取SPF級昆明小鼠

12、60只，分組及給藥方法同MES癲癇小鼠，在末次給藥1h后，各組予匹羅卡品400mg/kg腹腔注射，立即觀察小鼠的癇性發(fā)作30min，記錄小鼠發(fā)生發(fā)作性陣攣潛伏期及死亡潛伏期。
　　 5統(tǒng)計學方法
　　 數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料用(x)±s表示，各組比較采用重復測量的方差分析，組間比較采用Tukey法;強直性驚厥發(fā)作率的比較用R×C表資料的卡方檢驗;P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.01表

13、示差異有顯著統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1柴胡黃芩配伍應用對最大電休克模型的影響
　　 各組之間的驚厥率差異有統(tǒng)計學意義(x2=59.000，P＜0.001)，B、C、D、F組均能降低小鼠驚厥率，其中以B、F組降低明顯。
　　 2柴胡黃芩配伍應用對戊四氮急性致病小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期、發(fā)作性強直潛伏期及死亡潛伏期的影響
　　 B、C、D、E、F組均能延長小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期、發(fā)作性強直潛伏期及

14、死亡潛伏期，與A組相比，C、D、E組無顯著差異，B、F組有顯著差異。
　　 3柴胡黃芩配伍應用對士的寧急性致癇小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期及死亡潛伏期的影響
　　 B、C、D、E、F組均能延長小鼠發(fā)作性陣攣潛伏期，但與A組相比較均無統(tǒng)計學意義。B、C、D、E、F組均能延長小鼠死亡潛伏期，與A組相比，C、D、E組無統(tǒng)計學意義，B、F組有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，且B組同C、D、E組比有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。