柴胡疏肝湯對癲癇-抑郁共病模型大鼠海馬TNF-α及5-HT的影響.pdf

1、背景：
　　癲癇(epilepsy)是慢性反復發(fā)作性短暫腦功能失調(diào)綜合征，以腦神經(jīng)元異常放電引起反復癇性發(fā)作為特征，是發(fā)作性意識喪失的常見病之一。臨床具有發(fā)作性、短暫性、重復性的特點，癲癇與抑郁癥顯著相關，癲癇患者生存期抑郁癥發(fā)生率至少30％，抑郁癥是影響生活質(zhì)量最顯著的因素，嚴重抑郁癥是癲癇患者自殺的重要原因之一。癲癇患者中抑郁癥可出現(xiàn)在癇性發(fā)作之前、之后，或者出現(xiàn)在發(fā)作期間。合并有抑郁癥的患者臨床發(fā)作的控制往往也不理想，抑郁癥

2、可貫穿癲癇疾病整個病理過程中，并影響著癇性發(fā)作程度、持續(xù)時間及療效等。
　　癲癇與抑郁共病的機制早期觀點認為，癲癇反復發(fā)作，患者社會及精神壓力大繼而出現(xiàn)抑郁癥。但近來臨床研究逐漸認識到包括抑郁癥在內(nèi)的情志失調(diào)是伴隨各種腦損害而出現(xiàn)的結(jié)果。在癲癇持續(xù)狀態(tài)后8天實驗動物可出現(xiàn)焦慮樣情志失調(diào)，并且癲癇伴抑郁癥的病理表現(xiàn)可見海馬體積的減少、杏仁核的神經(jīng)病理損害以及下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA)功能的異常。中樞存在以5-HT能神經(jīng)信號通路

3、為主的5-HT軸的神經(jīng)調(diào)節(jié)通路，同時5-HT軸參與免疫調(diào)節(jié)，通過激活交感神經(jīng)系統(tǒng)，參與調(diào)節(jié)免疫相關細胞活性，影響細胞因子的釋放及抗體的表達，從而影響癲癇。海馬在癲癇發(fā)展為抑郁共病過程中顯得尤為重要，顳葉癲癇模型所引發(fā)的炎癥表現(xiàn)在海馬區(qū)。動物實驗顯示:柴胡有效成分柴胡皂苷α可以顯著逆轉(zhuǎn)抑郁模型大鼠腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)，提高5-HT濃度，減少因癇性發(fā)作引起的神經(jīng)細胞損傷。
　　因此，如何正確、有效的防治癲癇抑郁共病稱為醫(yī)學界廣泛關注的問題。

4、但目前對于癲癇與抑郁共病的治療，臨床仍然以口服抗癲癇藥物為主，聯(lián)合服用抗抑郁藥物為輔。大量證據(jù)顯示5-HT有抗癲癇作用，對癲癇患者安全有效，甚至西酞普蘭可以降低癇性發(fā)作50％以上，然而有研究認為抗抑郁藥物5-HT再攝取抑制劑存在誘發(fā)癲癇的風險，臨床多數(shù)抗抑郁藥物注明癲癇患者慎用，也給癲癇抑郁共病患者的治療帶來阻力。傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療本病顯示出獨特優(yōu)勢，從肝論治治療癲癇患者，不僅存在抗癲癇作用，還可以調(diào)整抑郁狀態(tài)，同時具有緩效、作用時間長、副

5、作用少、毒副作用輕等特點。本課題以從肝論治為立足點，通過觀察柴胡疏肝湯對癲癇-抑郁共病模型大鼠的行為學觀察以及大鼠海馬中TNF-α和5-HT含量的影響，探討柴胡舒肝湯對TNF-α、5-HT參與癲癇抑郁共病機制的干預作用，為中醫(yī)藥治療癲癇與抑郁共病提供實驗依據(jù)。
　　癲癇在中醫(yī)學屬于“癇病”范疇，我國歷代醫(yī)家很在就在臨床中發(fā)現(xiàn)癲癇患者中常伴有情志失調(diào)表現(xiàn)，而情志失調(diào)又以抑郁、焦慮等“肝證”相關的證候表現(xiàn)為主，癇病的病機與肝的疏泄功能

6、異常關系密切，風、痰、瘀三者的產(chǎn)生均為肝失疏泄的病理表現(xiàn)，因此從肝論治是治療癲癇-抑郁共病的關鍵所在。
　　目的：
　　本實驗“從肝論治”為出發(fā)點，通過觀察柴胡疏肝湯對氯化鋰—匹羅卡品慢性顳葉癲癇-抑郁共病模型大鼠TNF-α和5-HT含量的影響，探討柴胡舒肝湯對TNF-α、5-HT參與癲癇抑郁共病機制的干預作用以及可能存在的作用途徑及機制，為癲癇與抑郁共病“從肝論治”的中醫(yī)理論提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1.

7、實驗方法
　　建立氯化鋰—匹顳羅卡品慢性顳葉癲癇大鼠模型，造模完成6周后將模型大鼠隨機分為5組:分別為西酞普蘭組(A)，生理鹽水組(B)，柴胡疏肝湯高、中、低劑量組(C、D、E)，A組給予西酞普蘭，B組給予生理鹽水，C、D、E組分別給予高、中、低不同濃度的柴胡疏肝湯，連續(xù)灌胃給藥4周，2次/天。干預前后，RT-PCR法檢測大鼠海馬TNF-α水平，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測大鼠海馬5-HT含量，通過強迫游泳和糖精偏好實驗進行抑郁行為學監(jiān)

8、測，大鼠癇性發(fā)作次數(shù)通過錄像監(jiān)測系統(tǒng)24h監(jiān)測。
　　2.統(tǒng)計學方法
　　運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包，計量資料用(x)±s表示，模型篩選采用配對t檢驗。各組之間的比較采用單因素方差分析(One—way ANOVA)進行統(tǒng)計處理，大鼠癇性發(fā)作次數(shù)采用單個重復測量的方差分析進行統(tǒng)計處理，P＜0.05表示具有統(tǒng)計學意義，P＜0.01表示有顯著統(tǒng)計學意義。TNF-α和5-HT相關性采用雙變量相關分析，Spearman相關系數(shù)rs

9、=-0.732，P＜0.01。
　　結(jié)果：
　　1.藥物干預前后模型大鼠抑郁行為的變化
　　與干預前相比，藥物干預后西酞普蘭組、中藥高劑量組、中藥中劑量組FST累計不動時間明顯縮短(P＜0.01);干預后西酞普蘭組與生理鹽水組比較，西酞普蘭組累計不動時間明顯縮短，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);中藥高、中、低劑量組與生理鹽水組比較，高、中劑量組累計不動時間明顯縮短，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，低劑量組累計不動時間，有統(tǒng)

10、計學意義(P＜0.05);西酞普蘭組與中藥高、中劑量組比較無明顯差異(P＞0.05);中藥高、中、低劑量組比較，中藥高、中劑量組累計不動時間明顯小于低劑量組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。與干預前相比，藥物干預后西酞普蘭組、中藥高劑量組、中藥中劑量組糖精水消耗量明顯增加(P＜0.01);干預后西酞普蘭組與生理鹽水組比較，西酞普蘭組糖水消耗量明顯升高，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);中藥高、中、低劑量組與生理鹽水組比較，高、中劑量組糖水消耗

11、量明顯增加，有明顯統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，低劑量組糖水消耗增加，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);西酞普蘭組與中藥高、中劑量組比較無明顯差別(P＞0.05);中藥高、中、低劑量組比較，中藥高、中劑量組糖水消耗量高于低劑量組，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.藥物干預前后模型大鼠癇性發(fā)作次數(shù)的變化
　　與干預前比較，用藥4周后西酞普蘭組、中藥高劑量組、中藥中劑量組大鼠癇性發(fā)作次數(shù)明顯減少(P＜0.01)。西酞普蘭組與生理

12、鹽水組比較，西酞普蘭組癇性發(fā)作次數(shù)減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);中藥高、中、低劑量組與生理鹽水組比較，高、中劑量組癇性發(fā)作次數(shù)減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，低劑量組癇性發(fā)作次數(shù)無顯著變化，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);西酞普蘭組與中藥高、中劑量組比較無明顯差別(P＞0.05);中藥高、中、低劑量組比較，中藥高、中劑量組癇性發(fā)作次數(shù)明顯少于低劑量組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，高、中劑量組對癲癇發(fā)作次數(shù)的療效高于低劑量組，低

13、劑量組療效較差。給藥前模型組大鼠癇性發(fā)作次數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.給藥4周后大鼠海馬5-HT含量的變化
　　給藥4周后，西酞普蘭組、中藥高劑量組、中藥中劑量組5-HT含量升高。西酞普蘭組與生理鹽水組比較，西酞普蘭組5-HT含量明顯增加，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);中藥高、中、低劑量組與生理鹽水組比較，高、中劑量組5-HT含量增加，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，低劑量組5-HT含量增加不顯著，無統(tǒng)計學意

14、義(P＞0.05);西酞、中藥高劑量組、中藥中劑量組比較無明顯差異(P＞0.05);中藥高、中、低劑量組比較，中藥高、中劑量組5-HT含量高于低劑量組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4.給藥4周后大鼠海馬中TNF-α mRNA熒光定量PCR電泳結(jié)果集表達量
　　藥物干預后，西酞普蘭組與生理鹽水組比較，西酞普蘭組TNF-α mRNA表達量明顯減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);中藥高、中、低劑量組與生理鹽水組比較，高、中

15、劑量組TNF-α mRNA表達量減少，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，低劑量組TNF-α mRNA表達量減少不明顯，無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);西酞普蘭組、中藥高劑量組、中藥中劑量組比較無明顯差異(P＞0.05);中藥高、中、低劑量組比較，中藥高、中劑量組TNF-α mRNA表達量減少優(yōu)于低劑量組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.本實驗成功建立氯化鋰—匹羅卡品慢性顳葉癲癇-抑郁共病模型，穩(wěn)定性好，為后續(xù)實