天津市性活躍人群血清沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白抗體的檢測.pdf

1、沙眼衣原體（ Chlamydia trachomatis C.t）是引發(fā)性傳播疾?。?Sexually Transmitted Diseases STD）及泌尿生殖道感染性疾病的主要病原體。據(jù)WHO數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界范圍內(nèi)每年有約1.27億沙眼衣原體感染新發(fā)病例。近年來，沙眼衣原體引發(fā)的泌尿生殖道感染在全球呈逐年增長態(tài)勢，已居于性傳播疾病的首位。流行病學(xué)調(diào)查顯示，衣原體感染癥狀隱匿，通常不被發(fā)現(xiàn)或不被治療，感染持續(xù)存在，最終可引起盆腔炎、異

2、位妊娠、不孕以及男性前列腺炎等多種嚴(yán)重并發(fā)癥。C.t感染生殖道后亦可協(xié)同人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus HPV）的感染并增加 HIV傳播的危險性，且與宮頸鱗狀細(xì)胞癌（ Squamous Cell Carcinoma SCC）發(fā)病率呈正相關(guān)。因此，早期開展C.t感染的篩查，盡早發(fā)現(xiàn)感染者和無癥狀帶菌者并給予充分治療，對C.t傳播的防控具有重要意義。
　　然而我國現(xiàn)有的各種檢測方法中存在取材痛苦、敏感性和特異性

3、不高、結(jié)果判定有主觀性等各種缺陷，從而不適于作為C.t的篩查手段。而國內(nèi)現(xiàn)階段大規(guī)模采用的C.t檢測試劑盒所針對的抗原蛋白大部分是主外膜蛋白（Major outer membrane protein MOMP）、熱休克蛋白60（Heat shock protein HSP-60）和脂多糖（Lipopolysaccharide Lps）這三種抗原。其中MOMP和HSP-60有較好的抗原性及特異性，但其抗原性排名均未在前20種免疫優(yōu)勢蛋白之

4、列。Lps又缺乏特異性，易與其它病原體Lps抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)而影響檢測的準(zhǔn)確性。
　　因此，為優(yōu)化沙眼衣原體感染的實(shí)驗(yàn)室篩查方法，提高檢測的敏感性和特異性，我們在以往研究的基礎(chǔ)上，選取了Pgp3、CT694和CT875這3種C.t特異性免疫優(yōu)勢蛋白的組合，并收集了天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院非性病門診15-40歲性活躍人群血清300例，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA）檢測血

5、清中上述三種蛋白的抗體存在情況，同時對每一份血清樣本均進(jìn)行微量免疫熒光（Microimmunofluorescence MIF）檢測，通過比對兩種方法的檢測結(jié)果，了解新建立ELISA方法的敏感性和特異性。
　　目的：表達(dá)3種C.t特異性的免疫優(yōu)勢蛋白：衣原體質(zhì)粒編碼蛋白3（Pgp3）、Ct875編碼蛋白（CT875）、Ct694編碼蛋白（CT694）。收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院非性病門診性活躍人群血清共300份。ELISA法檢測血清中

6、上述三種蛋白抗體的存在情況，并與MIF法檢測結(jié)果相比對，了解新建立ELISA方法的敏感性與特異性。
　　方法：將編碼上述三種蛋白的基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入大腸桿菌，瓊脂糖凝膠電泳鑒定轉(zhuǎn)化成功后，將菌液擴(kuò)大培養(yǎng)，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，超聲碎菌獲得蛋白。表達(dá)成功的蛋白經(jīng)GST Magbeads純化，SDS電泳鑒定。收集天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院非性病門診15-40歲就診者血清共300例。用所得蛋白裂解液包被谷胱甘肽預(yù)包被的ELISA96孔板，飽和板底的

7、谷胱甘肽，分別加入制備好的血清、鼠源性單克隆抗體作為一抗，HRP標(biāo)記的羊抗人、羊抗鼠IgG作為二抗，運(yùn)用ELISA方法檢測各血清樣本中三種蛋白的存在情況。制備衣原體EB抗原片，分別以與兔抗EB抗體和血清樣本為I抗，F(xiàn)ITC標(biāo)記的羊抗兔IgG抗體和Cy3標(biāo)記的羊抗人 IgG抗體為Ⅱ抗，MIF法檢測血清抗體存在情況。比較兩種方法的檢測結(jié)果。
　　結(jié)果：1.三種蛋白重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化成功，蛋白成功表達(dá)。
　　2.ELISA結(jié)果：300例

8、非性病門診性活躍人群血清篩查結(jié)果如下：共篩出衣原體感染陽性者63例。沙眼衣原體感染總陽性率21％。其中15~20歲年齡組陽性者7例，陽性率21.88%；21~25歲年齡組陽性者9例，陽性率19.15%；26~30歲年齡組陽性者22例，陽性率25.88%；31~35歲年齡組陽性者17例，陽性率21.52%；36~40歲年齡組陽性者8例，陽性率14.04%。
　　3.MIF結(jié)果：共篩選出沙眼衣原體感染陽性者65例，陰性者235例。

9、r>　　4.兩種檢測方法比對結(jié)果：63例ELISA法陽性結(jié)果血清中，62例微量免疫熒光法結(jié)果陽性，1例陰性。237例ELISA陰性結(jié)果血清中，234例微量免疫熒光結(jié)果陰性，3例陽性。以MIF法為標(biāo)準(zhǔn)，3種免疫優(yōu)勢蛋白組合篩選檢測的敏感度為95.38%（62/62+3），特異度為99.57%（234/234+1）。
　　結(jié)論：1.新建立ELISA方法對天津市性活躍人群沙眼衣原體Pgp3、CT875、CT694三種免疫優(yōu)勢蛋白抗體的總