桂苓神術(shù)湯利尿藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制初步研究.pdf

1、孟河醫(yī)派是源出江蘇常州孟河的一大地域性醫(yī)學(xué)流派，其高深的學(xué)術(shù)造詣，豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，在中醫(yī)界享有“吳中醫(yī)學(xué)甲天下，孟河名醫(yī)冠吳中”的美譽(yù)。桂苓神術(shù)湯為孟河醫(yī)派多年臨床用治療脾虛水泛證的有效方劑，該方療效確切，應(yīng)用廣泛。但目前關(guān)于該方的相關(guān)藥理學(xué)研究尚未見報(bào)道，其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制亦不明確。本論文以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，按照中醫(yī)藥現(xiàn)代化的基本思路，采用現(xiàn)代藥理方法篩選了桂苓神術(shù)湯的利尿藥效部位，初步研究了其利尿作用機(jī)制；并應(yīng)用現(xiàn)代分析技術(shù)對

2、桂苓神術(shù)湯藥效部位進(jìn)行了成分分析，建立了藥效部位指紋圖譜并分析了與組方藥味的相關(guān)性；運(yùn)用質(zhì)譜學(xué)方法分析了藥效部位的主要成分，為該方更好的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步開發(fā)提供基礎(chǔ)研究。主要研究內(nèi)容和結(jié)論如下：
　　(1)采用鹽水負(fù)荷大鼠模型研究了桂苓神術(shù)湯的利尿作用并篩選了其利尿活性部位。研究結(jié)果表明，桂苓神術(shù)湯對鹽水負(fù)荷模型大鼠具有較顯著的利尿作用。陽性藥物呋塞米的利尿作用主要發(fā)生在給藥后1～2 h，而桂苓神術(shù)湯的利尿作用則緩和而持久，具體表

3、現(xiàn)在1～8 h。與苓桂術(shù)甘湯比較，桂苓神術(shù)湯的利尿作用明顯優(yōu)于苓桂術(shù)甘湯。桂苓神術(shù)湯的乙酸乙酯部位和萃余部位為其主要的利尿活性部位。
　　(2)初步研究了桂苓神術(shù)湯及利尿活性部位的利尿作用機(jī)制。采用電解質(zhì)分析儀對鹽水負(fù)荷模型大鼠尿中Na+、K+、Cl-的含量進(jìn)行了分析。研究結(jié)果表明，桂苓神術(shù)湯及其利尿活性部位能顯著增加大鼠尿中K+的排出量，但對Na+、Cl-無顯著影響，其利尿作用機(jī)制可能為增加大鼠尿液中K+的排泄。陽性藥物呋塞米則

4、能顯著增加大鼠尿中的Na+、K+、Cl-的排出量。與呋塞米相比，桂苓神術(shù)湯對電解質(zhì)的影響相對較小。
　　(3)建立了桂苓神術(shù)湯乙酸乙酯部位的高效液相色譜指紋圖譜。最佳色譜條件為：色譜柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5μm)，檢測波長278 nm，柱溫30℃，流速1 mL/min，流動相為乙腈-水(0.1％醋酸)，進(jìn)樣量為20μL，梯度洗脫程序?yàn)?～5 min乙腈為0～5％，5～10 min乙腈為5％～11

5、％，10～40 min乙腈為11％～40％，40～45 min乙腈為40％～58％，45～60 min乙腈為58％～98％，60～65 min乙腈為98％～98％，記錄65 min。該方法準(zhǔn)確、簡便，具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。通過對不同提取批次桂苓神術(shù)湯乙酸乙酯部位指紋圖譜研究發(fā)現(xiàn)有18個(gè)主要共有峰，與對照圖譜的相似度均大于0.90，所建立的桂苓神術(shù)湯乙酸乙酯部位指紋圖譜技術(shù)指標(biāo)穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。分析了桂苓神術(shù)湯乙酸乙酯部位與組方藥味的相

6、關(guān)性。桂苓神術(shù)湯乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜共有峰中，1號峰主要來源于苡仁，2、8號峰主要來源于厚樸，3號峰主要來源于白術(shù)和茅術(shù)，4、14號峰主要來源于茯苓，5、6、7號峰主要來源于砂仁，9號峰主要來源于白術(shù)，10、11號峰主要來源于桂枝，12、13、17號峰主要來源于陳皮，15號峰主要來源于半夏，16、18號峰未能歸屬。
　　(4)采用HPLC-DAD-ESI-MS對桂苓神術(shù)湯利尿活性部位--乙酸乙酯部位的主要化學(xué)成分進(jìn)行了分析