麝香保心丸藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、中藥是我國(guó)傳統(tǒng)文化和世界傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的精華，為中國(guó)乃至世界人民的健康做出了不可磨滅的貢獻(xiàn)。然而，由于中藥及復(fù)方中的化學(xué)成分復(fù)雜、體內(nèi)作用藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，因此對(duì)于其作用機(jī)制、體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化及代謝過(guò)程的研究也就成了無(wú)的放矢。藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確已成為嚴(yán)重制約中藥發(fā)展的“瓶頸”，不僅導(dǎo)致中藥及復(fù)方缺乏可靠的藥理學(xué)、毒理學(xué)研究數(shù)據(jù)，而且不能建立與國(guó)際接軌的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，最終造成我國(guó)中藥的出口率低、市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力薄弱。因此中藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究已成為中藥現(xiàn)代

2、化研究的關(guān)鍵問(wèn)題。 自上世紀(jì)80年代，日本學(xué)者田代真一提出了“血清藥理學(xué)”與“血清化學(xué)”的觀念以來(lái)，血清藥物化學(xué)的發(fā)展方興未艾。血清藥物化學(xué)認(rèn)為，中藥中雖含有眾多成分，但只有被吸收入血的成分才能產(chǎn)生作用。傳統(tǒng)中藥多為口服給藥，口服給藥后藥物成分無(wú)論經(jīng)過(guò)消化道直接吸收或經(jīng)消化分解成代謝產(chǎn)物或經(jīng)肝微粒體酶代謝成有活性的代謝產(chǎn)物，其有效物質(zhì)必須以血液為介質(zhì)輸送到靶點(diǎn)從而產(chǎn)生作用。因而給藥后的血清才是真正起作用的“制劑”，血清中含有的成

3、分才是中藥的體內(nèi)直接作用物質(zhì)。血清藥物化學(xué)是以整體動(dòng)物和復(fù)方的相互作用為研究對(duì)象，其研究思路符合中醫(yī)中藥的整體協(xié)同作用的觀點(diǎn)。 本論文采用血清藥物化學(xué)的分析手段研究麝香保心丸的體內(nèi)作用物質(zhì)基礎(chǔ)。HPLC-DAD-ESLD、HPLC-DAD-ESI-MS/MS以及GC-MS等多種成熟的串接技術(shù)的運(yùn)用為麝香保心丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了穩(wěn)定可靠的分析方法。 本研究首先采用LC-MS/MS及GC-MS的方法對(duì)麝香保心丸復(fù)方中所

4、含的主要化合物進(jìn)行了分析，為血清藥物化學(xué)研究提供了色譜方法。由于麝香保心丸中既含有揮發(fā)性成分也含有非揮發(fā)性成分，所以本論文聯(lián)合運(yùn)用HPLC-DAD-MS/MS和GC-MS技術(shù)對(duì)麝香保心丸中主要成分進(jìn)行定性研究。通過(guò)對(duì)HPLC-DAD-MS/MS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，共鑒定了包括人參皂苷、蟾蜍甾二烯、膽酸等多類成分在內(nèi)的47個(gè)主要化合物。GC-MS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)則通過(guò)NITS05數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，共鑒定了49個(gè)揮發(fā)性小分子化合物。HPLC-DAD

5、-MS/MS和GC-MS分析條件的建立及主要化合物的分析鑒定，為下一步血清藥物化學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。 在已建立的HPLC-DAD-MS/MS和GC-MS分析方法的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)優(yōu)化麝香保心丸的給藥劑量和血清前處理?xiàng)l件，建立了麝香保心丸血清藥物化學(xué)分析方法。運(yùn)用HPLC-DAD-MS/MS方法對(duì)麝香保心丸提取液、給藥血清和空白血清進(jìn)行對(duì)比分析，從含藥血清中共檢測(cè)到25個(gè)化學(xué)成分，鑒定了其中的17個(gè)原型入血成分及3個(gè)代謝產(chǎn)物。同時(shí)

6、，采用GC-MS方法分析對(duì)麝香保心丸提取液、給藥血清和空白血清進(jìn)行對(duì)比分析，從含藥血清中共鑒定出6個(gè)原型入血成分及4個(gè)代謝產(chǎn)物。在這些入血成分中，大部分化合物都已經(jīng)證明對(duì)心血管疾病有相關(guān)的治療作用。血清藥物化學(xué)的研究基本明確了麝香保心丸的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。 本論文根據(jù)血清藥物化學(xué)的研究結(jié)果，采用HPLC/DAD/ELSD聯(lián)用技術(shù)對(duì)麝香保心丸中8個(gè)主要的原型入血成分(藥效物質(zhì)基礎(chǔ))進(jìn)行了多成分定量研究。通過(guò)對(duì)多個(gè)藥效成分的同時(shí)定量研究