電針對大鼠腦缺血后腦水腫的調節(jié)作用及其機制初探.pdf

1、中風為急性腦血管疾病，由于腦血管的破裂或阻塞導致局部神經細胞的損傷，引發(fā)神經功能障礙。中風后的腦水腫也是引起中風病人致死致殘的重要繼發(fā)癥狀。腦水腫的發(fā)病機理十分復雜，近年來研究發(fā)現水通道蛋白(aquaporin，AQP)可能參與了這一過程。
　　針灸治療腦卒中在我國歷史悠久，臨床治療中，針刺干預對中風患者功能恢復有良好的效果，但其治病機制尚未最終明晰。本研究在以往工作基礎上，以大鼠大腦中動脈栓塞/再灌注(MCAO)為模型，利用核磁

2、共振(magnetic resonanceimaging，MRI)觀察電針干預對腦缺血再灌注損傷所致腦水腫的動態(tài)調節(jié)，并試圖從AQP4的磷酸化修飾以及四聚化水平的變化，闡明電針抗腦缺血效應的可能機制，為針刺療法的臨床應用提供科學依據。
　　主要研究結果如下:
　　1.電針對缺血再灌所致腦水腫及血腦屏障滲漏的影響
　　利用MRI的T2掃描，我們檢測了大鼠紋狀體及皮層在缺血以及電針干預后的組織含水量的變化。
　　再灌

3、3小時，電針組紋狀體和皮層(95.18±5.84，91.75±8.08)相比較缺血組紋狀體和皮層(106.18±9.03，110.60±10.85)的T2值有略微下降。
　　再灌5小時，電針組紋狀體的T2值(108.81±5.53)相比較缺血組(144.48±19.23，P＜0.05)有顯著減小，并且電針組皮層的T2值(100.86±7.85)相比較缺血組(128.90±12.58，P＜0.05)亦有顯著降低。
　　再灌24

4、小時，電針組紋狀體的T2值(125.12±5.02)比缺血組(141.9±7.37，P＜0.05)仍有顯著減小，而電針組皮層的T2值(120.06±5.47)相比較缺血組(152.60±10.80，P＜0.05)的升高亦有顯著。
　　再灌48小時，缺血側紋狀體和皮層的T2值與再灌24小時相比，增加仍極其顯著(P＜0.01)，但是電針組紋狀體和皮層的T2值(133.26±7.98，142.4±6.85)相比較缺血組的(152.65±

5、6.66，154±7.62)并無顯著差異。
　　利用MRI的T1掃描，我們檢測了大鼠在缺血以及電針干預后血腦屏障滲漏的變化。
　　再灌3小時，post-contrast T1 SIdiff值在缺血組(20.91±2.25)同側組織相比較電針組(19.38±1.03)略微有所增加。到再灌5小時時，缺血組與電針組的差距進一步擴大，缺血組(21.88±1.99)的post-contrast T1SIdiff值比電針組(17.63±

6、5.09)高很多。血腦屏障有雙向開放過程，再灌24小時，未檢測到血腦屏障滲透。到再灌48小時，缺血組T1Sidiff值(19.09±7.02)與電針組(9.37±0.97)有顯著差異。
　　通過T1掃描，PBV代表造影劑滲出血腦屏障浸入腦組織的體積。在再灌3小時，缺血組PBV(0.051±0.017cm3)的增加是電針組(0.020±0.002 cm3，P=0.06)的兩倍。再灌5小時，缺血組PBV值(0.093±0.018 cm

7、3)顯著高于電針組(0.019±0.0005 cm3，P＜0.05)和再灌3小時的值(P＜0.05)。再灌48小時，血腦屏障的滲出量低于再灌5小時，但是缺血組的PBV值(0.055±0.009 cm3)仍然高于電針組(0.030±0.007 cm3，P=0.05)。
　　在再灌3小時，血腦屏障的總滲透量(T1Sidiff×PBV)在缺血組(1.067±0.46)高于電針組(0.378±0.03，P=0.07)。到再灌5小時，T1S

8、Idiff×PBV的值在缺血組(2.043±0.53)相比較電針組(0.326±0.08，P＜0.05)有顯著增加。到再灌48小時，T1SIdiff×PBV的值在缺血組(1.056±0.14)相比電針組(0.284±0.05，P＜0.01)有更顯著的增加。
　　2.電針對缺血再灌后大鼠神經功能的影響
　　利用Garcia量表，我們對缺血再灌72小時后大鼠的神經功能進行評分，結果顯示缺血組的自主活動、外展以及反應性明顯弱于電針

9、組。
　　3.電針對缺血再灌72小時后大鼠腦梗死和腦腫脹程度的影響
　　再灌72小時后，尼氏染色顯示，電針組大腦梗死百分率(0.247±0.02，P＜0.05)與缺血組(0.413±0.07)相比明顯減小(P＜0.05)。與缺血組相比，再灌后72小時的腦腫脹程度也有所減輕。
　　4.電針對缺血再灌后大鼠腦內AQP4蛋白磷酸化修飾的影響再灌3h時，磷酸化AQP4蛋白在缺血組大鼠的大腦皮層的表達高于對照組，電針組(1.23

10、±0.26)與缺血組(1.54±0.16，P＜0.05)相比則明顯的減少，而紋狀體也有同樣的變化趨勢。
　　再灌1天時，磷酸化AQP4在缺血組(0.83±0.22)的表達量明顯下降，明顯低于對照組(1.62±0.27，P＜0.05)，同時與電針組相比也有所降低(0.91±0.24，P=0.06)。而在紋狀體這三組沒有明顯的變化。
　　5.電針對缺血再灌后大鼠腦內AQP4的M1和M23亞型mRNA含量的影響通過real tim

11、e PCR檢測AQP4 M1和M23兩種亞型的mRNA含量的變化，比較腦缺血以及電針干預對其的影響。
　　再灌3小時后，電針組與缺血組相比M1 mRNA的表達量較低(EA/is為0.91)，但是缺血組較對照組有所升高（is/con為1.25）。再灌24小時，電針組的表達量達到缺血組的2.42倍(P＜0.05)，而缺血組仍然高于對照組(is/con為1.32)。再灌3天時，電針組和缺血組相比雖沒有顯著性差異，但是上升趨勢較為明顯(1

12、0.66)，缺血組與對照組相比有明顯的增加(1.82，P＜0.05)。
　　M23 mRNA表達量的變化與M1相應時間點上的變化相似，再灌3小時時電針組是缺血組的0.94倍，但是缺血組與對照組相比有所增加(is/con為1.27)，再灌24小時時，電針組增長到缺血組的2.42倍，具有明顯的統(tǒng)計學差異，而缺血組仍然高于對照組(is/con為1.32)。再灌3天時，電針組與缺血組相比雖然沒有統(tǒng)計學差異，但是電針組是缺血組的9.76倍，

13、而缺血組則是對照組的2.58倍，具有顯著的統(tǒng)計學差異。
　　同時我們分析M1 mRNA和M23 mRNA比值在不同灌注時間后的變化。對照組M1與M23的比值是0.691。再灌3h，缺血組(0.678)M1與M23的比值和電針組(0.691)接近一致。再灌24h，缺血組(0.725)M1與M23的比值和電針組(0.696)相比有明顯的提高。再灌3天，缺血組(0.912) M1與M23的比值和電針組(0.762)相比有所提高。

14、　　6.電針對缺血再灌后大鼠腦內AQP4四聚化的影響
　　腦缺血再灌注后，無論在缺血側皮層還是紋狀體，AQP4四聚化程度均呈現動態(tài)變化。我們分析了缺血再灌3小時、1天和3天的數據，發(fā)現AQP4四聚化程度呈現先上升后下降的趨勢，在第1天時達到最高峰。皮層在第1天時，電針組四聚化程度明顯低于缺血組(P＜0.05)，而紋狀體在第3天時，電針組四聚化程度明顯低于缺血組(P＜0.05)，電針可影響腦缺血再灌注后的AQP4四聚化程度。

15、　　小結:
　　1)電針能明顯降低腦缺血再灌注后的腦梗死及腦水腫，減弱因缺血而導致的血腦屏障開放程度，并改善腦缺血后受損的神經功能，具有對抗腦缺血后神經損傷的保護作用。
　　2)缺血性腦水腫進程中伴隨有AQP4磷酸化修飾水平的改變，而電針在再灌早期（再灌后3小時）可以下調AQP4的磷酸化水平。
　　3)電針可以提高AQP4 M1和M23兩種亞型的mRNA表達，并隨再灌時間延長逐步下調M1/M23的配比水平。