肺癌細(xì)胞來源的外泌體(exosomes)對腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移的作用.pdf

1、目的
　　近些年，有關(guān)外泌體(exosomes)的研究受到越來越多的關(guān)注。exosomes是一種由細(xì)胞主動分泌至胞外的納米級囊性小泡。多種類型的細(xì)胞都可以釋放exosomes，包括腫瘤細(xì)胞。早期研究者們發(fā)現(xiàn)，樹突狀細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞自身分泌的exosomes表面富含MHC分子和腫瘤抗原，能有效輔助抗原呈遞，誘發(fā)機體的免疫反應(yīng)，從而避免免疫耐受[1]，成為腫瘤免疫治療的新策略。這也讓越來越多的研究者們熱衷于發(fā)現(xiàn)exosomes帶有的分子

2、及其具備的功能。Exosomes含有的大量功能蛋白質(zhì)、mRNA、microRNA在質(zhì)膜的保護(hù)下具有生物學(xué)活性[2]，能對周圍受體細(xì)胞發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。經(jīng)過大量研究，人們發(fā)現(xiàn)exosomes是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)、信息交流的重要載體。近年來研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞來源的exosomes充當(dāng)信息交流的載體，能夠促進(jìn)共同培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞增殖[3-4]，但這方面相關(guān)機制的研究并不多。
　　本研究以肺腺癌A549細(xì)胞來源的exosomes為研究對象，探討其對

3、肺腺癌A549、Hcc827細(xì)胞增殖、遷移的影響，及其可能的作用機制。進(jìn)一步闡明了exosomes的生物學(xué)功能。同時，exosomes作為調(diào)控腫瘤的新機制，為治療腫瘤提供了新的思路。
　　方法
　　1、采用超速離心的方法從肺癌A549細(xì)胞的上清液中分離出腫瘤來源的exosomes。透射電子顯微鏡下觀察exosomes形態(tài)。
　　2、采用MTT法檢測A549源性的exosomes對肺癌A549、Hcc827細(xì)胞增殖的影響

4、。
　　3、Westernblot檢測A549源性的exosomes對腫瘤細(xì)胞增殖信號Src、Akt的影響，從而探索其對腫瘤細(xì)胞增殖的影響。
　　4、Transwell實驗檢測A549源性的exosomes對肺癌A549、Hcc827細(xì)胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果
　　1、透射電子顯微鏡下證實exosome的存在。觀察肺癌A549細(xì)胞來源的exosomes具有特征性的盤狀結(jié)構(gòu)，由雙層膜構(gòu)成，它們的直徑在30-10

5、0nm之間。
　　2、MTT實驗通過A549、Hcc827兩種細(xì)胞系證明Exosomes以時間和濃度依賴性的方式促進(jìn)A549和Hcc827細(xì)胞的增殖。各加入exosome組與對照組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、Westernblot結(jié)果顯示exosomes表面富含四次跨膜蛋白CD9。進(jìn)一步證實exosomes以時間和濃度依賴性的方式促進(jìn)A549和Hcc827細(xì)胞的增殖。在此過程中伴隨有p-Akt和p-