穿心蓮提取物對小鼠腘窩淋巴結模型及P815細胞脫顆粒模型的作用研究.pdf

1、目的：穿心蓮注射液臨床過敏反應多有發(fā)生，其安全問題亟需解決，利用小鼠直接法腘窩淋巴結(D-PLNA)試驗及P815細胞脫顆粒模型對穿心蓮提取分離物進行類過敏成分篩選，為穿心蓮制劑的質量控制和安全有效性提供參考。
　　方法：(1)建立直接腘窩淋巴結模型：雌性BABL/c小鼠隨機分組，小鼠一側單次足趾部皮下給予受試物，每天測量足趾的厚度；6天后處死，摘取兩側淋巴結(PLN)，稱重，確定最佳取材時間，計算重量指數(shù)(Weights ind

2、ex，WI)，細胞指數(shù)(cells index，CI)，比較PLN組織病理的變化。
　　(2)臨床常見易發(fā)生過敏反應的清熱類中藥注射液驗證腘窩淋巴結模型的可行性
　　(3) BALB/c小鼠腘窩淋巴結試驗及P815細胞脫顆粒試驗用于穿心蓮提取物致敏性的篩選研究，采用小鼠D-PLNA模型，以淋巴結重量指數(shù)(WI)及細胞指數(shù)(CI)、淋巴結病理切片為指標，對穿心蓮各級提取物進行致敏性研究。采用P815肥大細胞模型,觀察穿心蓮各級

3、提取物對細胞脫顆粒百分率，組胺含量、氨己糖苷酶釋放度的影響，并進一步評價穿心蓮提取物的致敏性，探討潛能的致敏成分。
　　結果：(1)成功建立小鼠腘窩淋巴結試驗模型，50μg氯化汞和0.75mg雙氯酚酸鈉可作為腘窩淋巴結試驗中的陽性藥，試驗結果分別為氯化汞WI=3.39±0.76，CI=6.82±1.28，雙氯酚酸鈉WI=2.33±0.35，CI=5.51±0.93。
　　(2)腘窩淋巴結試驗中腫節(jié)風(ZJFI)、清開靈(QK

4、LI)及穿心蓮(CXLI)注射液呈陽性結果，與臨床報道中中藥注射液的不良反應結果大致一致。腘窩淋巴結試驗具有可行性。
　　(3)D-PLNA實驗結果顯示：穿心蓮粗提物(AEE)組、乙酸乙酯部位(EAE)組及正丁醇部位(NBE)組的淋巴結重量均顯著增加，淋巴數(shù)目明顯增多，淋巴結重量指數(shù)WI>2,細胞指數(shù)CI>5；而水部位(AE)組淋巴結重量未見增加。三個穿心蓮內酯單體組：NAD、AND、DDA均出現(xiàn)淋巴結重量增加，淋巴數(shù)目明顯增多，

5、WI>2，CI>5；細胞實驗結果顯示：穿心蓮粗提物、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和三個穿心蓮內酯單體(NAD、AND、DDA）均能可顯著提高P815細胞脫顆粒百分率、組胺含量及氨己糖苷酶釋放度。
　　結論：小鼠腘窩淋巴結試驗最佳取材時間為給藥后第5天，D-PLNA用于藥物類過敏物質的篩選具有可行性，穿心蓮提取物(AEE、TLA、EAE、NBE)及三個穿心蓮內酯單體(NAD、AND、DDA)具有潛在的致敏性。穿心蓮內酯是其抗炎、解熱、抗