多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系CZ-1的建立和骨髓瘤細(xì)胞免疫球蛋白重鏈基因可變區(qū)的研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系CZ1的建立和骨髓瘤細(xì)胞免疫球蛋白重鏈基因可變區(qū)的研究姓名：張波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：血液病指導(dǎo)教師：侯健2002.5.1第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征；用免疫固定電泳技術(shù)檢測(cè)CZ一1細(xì)胞是否分泌單克隆^輕鏈，用熒光定量PCR法檢測(cè)CZ1細(xì)胞是否被EB病毒感染：用流式細(xì)胞儀分析Cz一1細(xì)胞的免疫表型；用染色體G分帶法研究Cz一1細(xì)胞的遺傳學(xué)特征。以重鏈基因可變區(qū)基因家族(VHlVH6

2、)特異性引物，用PCR法擴(kuò)增骨髓瘤細(xì)胞系Cz一1細(xì)胞和98例MM患者外周血單個(gè)核細(xì)胞vH基因片段，純化后的PCR產(chǎn)物和pMDl8T載體連接并轉(zhuǎn)化JMl09細(xì)菌，經(jīng)克隆鑒定后，用末端雙脫氧法測(cè)定目的DNA片段的序列并和其對(duì)應(yīng)的胚系VH基因序列比較。結(jié)果：Cz一1細(xì)胞在骨髓基質(zhì)細(xì)胞或皮膚成纖維細(xì)胞做為飼養(yǎng)細(xì)胞或上述飼養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)上清做為條件培養(yǎng)液時(shí)，可以持久增殖，CZ1細(xì)胞分泌單克隆^輕鏈，CZ一1細(xì)胞培養(yǎng)上清和患者血、尿免疫固定電泳結(jié)果顯示

3、在同一位置出現(xiàn)^輕鏈單株峰；EB病毒陰性：CZ一1細(xì)胞在瑞氏染色下呈典型的原、幼漿細(xì)胞形態(tài)，組織化學(xué)染色結(jié)果為：酸性磷酸酶染色()，髓過(guò)氧化物酶()；細(xì)胞免疫表型為CD38、CD56、CDl38且高表達(dá)CD49d、CD54、CD44、CD58等粘附分子；不表達(dá)髓系及T細(xì)胞系抗原；B細(xì)胞系抗原只有CDl0高表達(dá)，不表達(dá)CDl9等；不表達(dá)CD40、CD40L、CD95、CD95L；骨髓來(lái)源和外周血來(lái)源的CZ1細(xì)胞的免疫表型無(wú)明顯不同，不同部

4、位來(lái)源的CZ一1細(xì)胞，其重排的VH基因序列完全相同：核型分析結(jié)果為i(1q)，8q，13q，i(17q)，i(18q)，M。刪細(xì)胞對(duì)各V。基因家族的取用順序?yàn)椋篤H3v。lv。4VH2V。5VH6；MM細(xì)胞VH基因互補(bǔ)決定區(qū)R：S等于967，而骨架區(qū)R：S等于087，而且隨著疾病的進(jìn)展，VH基因并不發(fā)生進(jìn)一步的突變。廠結(jié)論：從一例刪患者的外周血和骨髓同時(shí)建立了一株生物學(xué)特性相同的分泌九輕鏈的MM細(xì)胞系CZ—l。刪前體細(xì)胞在進(jìn)行VDJ基因