苜蓿青貯用乳酸菌的選育.pdf

1、本研究從我國河南、吉林、山西、黑龍江、河北5省搜集的115個苜蓿樣品中分離乳酸菌，結(jié)合抗菌活性、發(fā)酵苜蓿粉漿特性及結(jié)構(gòu)性糖的利用能力三個指標(biāo)篩選適于改善苜蓿青貯品質(zhì)的優(yōu)良乳酸菌；研究優(yōu)良菌株對苜蓿青貯動態(tài)發(fā)酵過程中菌群多樣性、飼料發(fā)酵品質(zhì)及營養(yǎng)價值的影響；通過馴化和離子束誘變提高菌株分解纖維素的能力。
　　本研究表明：選育的優(yōu)良乳酸菌發(fā)酵苜蓿粉的能力較強(qiáng)，能夠利用多糖和纖維素物質(zhì)，有效改善苜蓿青貯品質(zhì)，本研究菌種選育的方法為進(jìn)一步

2、開發(fā)苜蓿青貯添加劑提供新的思路。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1.通過牛津杯雙層平板法對分離的264株乳酸菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，表明18株乳酸菌對大腸桿菌、沙門氏菌和單核增生李斯特氏菌的抗菌活性均較強(qiáng)。從山西省分離得到的72株乳酸菌中篩選到發(fā)酵苜蓿粉漿（DM，7％）pH較低的18株菌，其中5株菌抗菌活性較強(qiáng)，且該5株菌中菌株ZZU A340、ZZU A345和ZZU A380在發(fā)酵苜蓿粉漿(DM，40%）過程中的pH值相對較低，菌株ZZU A34

3、5在分子量為3000的1%葡聚糖純?nèi)芤褐邪l(fā)酵24 h的pH最低。結(jié)合生理生化特征及16S rRNA序列分析，菌株ZZU A345被鑒定為Lactobacillus plantarum。
　　2.通過發(fā)酵葡聚糖或木聚糖性能、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）的分解性能及碳源發(fā)酵結(jié)果篩選利用細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)性糖的乳酸菌。結(jié)果表明，發(fā)酵24 h時，與不加菌的對照相比，接種菌株ZZU A313和ZZU A344的葡聚糖MRS和分子量不同（MW:30

4、00和10000）的葡聚糖純?nèi)芤旱膒H值均較低，接種ZZU A341的木聚糖MRS和木聚糖（MW:10000）純?nèi)芤旱膒H值較低。剛果紅染色后，上述篩選的3株菌在CMC-Na平板上均出現(xiàn)清晰的透明圈。碳源發(fā)酵表明，在細(xì)胞壁纖維素或半纖維素組成糖中，菌株ZZU A313和ZZU A341能夠利用D/L-阿拉伯糖、D-木糖、葡萄糖、果糖、甘露糖，而菌株 ZZU A344和ZZU A345能夠利用L-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、半乳糖。
　

5、　3.青貯結(jié)果表明，與自然青貯相比，接種乳酸菌ZZU A313和ZZU A345均能夠明顯降低苜蓿青貯的pH值；與接種商業(yè)菌株相比，接種乳酸菌ZZU A313青貯60 d和100 d時pH相對均較低，乳酸含量均較高，且均未檢測到丙酸和丁酸存在。接種乳酸菌ZZU A345在青貯60 d時的霉菌數(shù)及在100 d時的大腸桿菌數(shù)均明顯少于菌株ZZU A313的處理組，尤其在100 d時的蛋白含量最高。
　　4.菌株ZZU A313、ZZU

6、 A341和ZZU A344的馴化結(jié)果表明，相比其原始菌株，馴化得到的菌株313XH-7-9發(fā)酵葡聚糖溶液的pH值低于馴化菌株344XH-9-7，菌株341XH-7-7發(fā)酵木聚糖溶液的pH相對較低。表明馴化可以提高菌株發(fā)酵葡聚糖或木聚糖溶液的能力。發(fā)酵苜蓿粉（DM，40%）表明，相對于不加菌的自然發(fā)酵和接種商業(yè)菌株及原始菌株的發(fā)酵結(jié)果,接種馴化菌株313XH-7-9在發(fā)酵12 h、18 h和72 h時的pH值均較低，且在發(fā)酵苜蓿粉72

7、h的半纖維素、纖維素及可溶性灰分含量略有差異（p<0.05）。而接種馴化菌株341XH-9-10在發(fā)酵12 h的pH值低于其發(fā)酵18 h及72 h的pH值，且在苜蓿粉發(fā)酵72 h時纖維素含量有所降低（p<0.05）。表明馴化能夠提高菌株發(fā)酵苜蓿粉的性能。
　　5.離子束誘變抗菌活性及發(fā)酵苜蓿粉能力均較強(qiáng)的乳酸菌ZZU A340、ZZU A345和ZZU A380，篩選對苜蓿粉（DM，40%）、葡聚糖或木聚糖發(fā)酵能力較強(qiáng)的突變株，發(fā)

8、現(xiàn)菌株ZZU A345的正突變率均最高。CMC-Na平板篩選結(jié)果表明，在菌株ZZU A345的正突變株中透明圈直徑大于12mm以上的菌株占21.55%（出發(fā)菌株的透明圈直徑為4.5 mm）。將菌株ZZUA345的突變株連續(xù)傳13代，分解CMC-Na的遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，突變株345-25和345-177均有11代能夠在 CMC-Na平板上出現(xiàn)較大透明圈。表明離子束誘變方法在一定程度上可以提高乳酸菌發(fā)酵苜蓿粉、葡聚糖、木聚糖及CMC-Na