優(yōu)良乳酸菌的選育及在保育豬生產(chǎn)中的應(yīng)用研究.pdf

1、對(duì)豬樣品及東部地區(qū)苜蓿樣品中的乳酸菌進(jìn)行系統(tǒng)的分類鑒定及理化性能研究；篩選具有較強(qiáng)抑菌活性、耐受人工胃腸液環(huán)境并快速產(chǎn)酸的優(yōu)良乳酸菌應(yīng)用于保育豬生產(chǎn)中，評(píng)價(jià)其對(duì)保育豬生長(zhǎng)過(guò)程中排泄物及腸道微生物多樣性，以及對(duì)保育豬生長(zhǎng)性能的影響。為抗生素低減型生豬生產(chǎn)找到了新的途徑，為乳酸菌添加劑的制作提供優(yōu)良的菌種。
　　根據(jù)乳酸菌的生理生化特征、16S rRNA基因序列分析，可以從豬樣品中一共分離到52株乳酸菌，這些菌株經(jīng)過(guò)鑒定，提示一共包括

2、了Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus amylovorus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus, Bifidobacterium, Lactobacillus salivarius, Weissella, Morganella morganii, Str

3、eptococcus alactolyticus, Enterococcus faecalis, Lactococcus lactis和Enterococcus在內(nèi)的14種乳酸菌菌種。通過(guò)雙層牛津杯平板法從這些菌株中篩選到2株對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌及李斯特氏菌均有較強(qiáng)抑菌活性的乳酸菌P83和P84。對(duì)其抑菌活性物質(zhì)做初步分析的時(shí)候可以發(fā)現(xiàn)，兩株菌株的發(fā)酵上清液在排除酸和過(guò)氧化氫的作用后依然保持較強(qiáng)的抑菌活性；以上的結(jié)果表明P83和P84的

4、發(fā)酵上清液中除了酸和過(guò)氧化氫外，還可能存在著細(xì)菌素等抑菌活性物質(zhì)。
　　從我國(guó)東部河北，上海，遼寧，江蘇、山東和北京6個(gè)地區(qū)共收集到苜蓿樣品125份，并且從其中分離出242株的乳酸菌，采用雙層牛津杯法評(píng)定了這242株乳酸菌的抑菌活性，并且從中篩選出來(lái)了62株抑菌活性比較強(qiáng)的優(yōu)良的乳酸菌；對(duì)這62株乳酸菌進(jìn)行16S rRNA基因序列分析發(fā)現(xiàn)，分離到的桿菌較少共13株，其中包括魏斯氏菌屬5株，共4個(gè)種：Weissella，Weisse

5、lla mino，Weissella confusa和Weissella viridescens；乳酸桿菌屬一共8株，一共有3個(gè)種：Lactobacillus curvatus，Lactobacillus sakei和Lactobacillus plantarum。分離到的球菌數(shù)量比較多，一共有49株球菌，其中包括了腸球菌屬9株，一共有4個(gè)種：Enterococcus faecalis，Enterococcus mundtii，Ente

6、rococcus和Enterococcus hirae；明串珠菌屬一共17株，一共有3個(gè)種：Leuconostoc，Leuconostoc citreum和Leuconostoc mesenteroides；戊糖片球菌屬一共9株，共1個(gè)種：Pediococcus pentosaceus；乳酸乳球菌屬一共14株，共3個(gè)種：Lactococcus lactis，Lactobacillus sakei和Lactococcus garvieae

7、；通過(guò)生理生化實(shí)驗(yàn)以及人工模擬胃腸液實(shí)驗(yàn)對(duì)這些乳酸菌的一些生長(zhǎng)的特性和對(duì)胃腸液耐受的能力進(jìn)行進(jìn)一步研究，其中菌株ZZU A190在pH3.0～10.0,鹽濃度0～6.5％，人工腸液和人工胃液等條件下都表現(xiàn)出很強(qiáng)的耐受能力。
　　通過(guò)生理生化實(shí)驗(yàn)、抑菌活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)以及人工胃腸液耐受實(shí)驗(yàn)，對(duì)從豬樣品和苜蓿樣品中分離到的及實(shí)驗(yàn)室保存的乳酸菌進(jìn)行篩選，篩選到抑菌活性較強(qiáng)和對(duì)人工胃腸液有較好耐受性能的菌株ZZU A190和ZZU A203作

8、為制備乳酸菌添加劑的菌種。將它們作為添加劑進(jìn)行保育豬飼喂研究的結(jié)果顯示，抗生素或抗生素與乳酸菌發(fā)酵飼料聯(lián)合使用對(duì)保育豬糞便中乳酸菌的數(shù)量無(wú)顯著影響。單獨(dú)使用乳酸菌發(fā)酵飼料不僅能夠顯著增加保育豬糞便中乳酸菌的含量，而且使得糞便中大腸桿菌的數(shù)量顯著減少。這可能與抗生素的長(zhǎng)期使用導(dǎo)致產(chǎn)生了致病菌的抗性菌株，致使腸道微生物菌群失調(diào)有關(guān)。與抗生素陰性對(duì)照相比，日糧中只添加乳酸菌發(fā)酵飼料或抗生素與乳酸菌發(fā)酵飼料聯(lián)合添加均可以顯著提高保育豬的日增重；