特異性T細(xì)胞亞群在肺癌發(fā)病中的作用研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 Treg/Th17失衡在肺癌惡性胸腔積液發(fā)病中的機(jī)制研究
　　惡性胸腔積液（malignant pleural effusion，MPE）是晚期惡性腫瘤的常見并發(fā)癥，與患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。MPE中存在淋巴細(xì)胞（尤其是CD4+輔助性T細(xì)胞）聚集的現(xiàn)象，但其潛在的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制所知甚少。新近研究報(bào)道MPE中Treg細(xì)胞、Th17細(xì)胞數(shù)量較外周血顯著增高并伴隨著相關(guān)細(xì)胞因子水平的

2、改變，且與腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)，但兩者參與MPE的具體發(fā)病機(jī)制目前尚未完全明確。
　　本研究運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MPE和肺炎旁胸腔積液(parapneumonic effusion，PPE)中Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞數(shù)量，采用Real-Time PCR測(cè)定其特異性轉(zhuǎn)錄因子FoxP3和RORγt、mRNA水平，ELISA法測(cè)定IL-6、IL-17、IL-10和TGF-β1、趨化因子CCL17和CCL20濃度，并分析Treg/Th1

3、7失衡與患者預(yù)后的相關(guān)性。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn):1）MPE較PPE中Treg細(xì)胞比例增高，而Th17細(xì)胞比例減低，MPE Treg/Th17比例較PPE明顯增高(MPE vs.PPE:3.89±0.61 vs.0.39±0.09，P=0.0003);2)MPE患者較PPE患者胸水細(xì)胞Foxp3 mRNA水平明顯增高(MPE vs.PPE:3.05±0.62 vs.0.52±0.11，p=0.0012)，而RORγt水平降低(MPE vs

4、.PPE:0.7758±0.2256 vs.2.185±0.5816,p=0.0253);3)MPE較PPE中IL-10、TGF-β1和CCL17濃度明顯升高（MPE vs.PPE: IL-10，166.3±39.53pg/ml vs.40.38±10.92 pg/ml，p=0.0307; TGF-β1,10720±1274pg/ml vs.1747±293.2pg/ml,p＜0.0001;CCL17,341.1±88.22pg/ml

5、vs.119.2±19.80 pg/ml，p=0.0427），IL-6、IL-17及CCL20濃度降低（MPE vs.PPE:IL-6,2490±257.7pg/ml vs.4427±215.6pg/ml, p＜0.0001; IL-17,2.542±0.1408pg/ml vs.4.272±0.5413pg/ml, p=0.0148; CCL20,26.51±5.32 pg/ml vs.125.9±30.89pg/ml，p=0.003

6、9）;4）在MPE患者中，Treg/Th17高水平組患者的生存時(shí)間明顯短于低水平組患者（中位生存時(shí)間3.4months vs.6.7months，p=0.0002）。
　　終上所述，我們推斷CCL17和CCL20水平的改變是導(dǎo)致MPE中Treg/Th17失衡現(xiàn)象的主要原因，MPE患者中高水平的Treg/Th17提示預(yù)后不良。
　　第二部分 分泌IL-17的T細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子在肺癌發(fā)病中的作用研究
　　肺癌作為最常見

7、的肺部原發(fā)性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率均居各類惡性腫瘤之首，且仍呈持續(xù)上升的趨勢(shì)。持續(xù)炎癥刺激可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞形成，而腫瘤微環(huán)境中的炎癥細(xì)胞、細(xì)胞因子和趨化因子可以促進(jìn)腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，形成一個(gè)免疫抑制的環(huán)境從而導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展。既往研究揭示分泌IL-17的特異性T細(xì)胞亞群在腫瘤發(fā)病的免疫調(diào)控中發(fā)揮著重要作用，但其究竟抑瘤還是促瘤仍存在爭(zhēng)議，具體的作用機(jī)制尚未完全明確。
　　本研究運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)肺腺癌患者和健康對(duì)照者外周血中Th

8、17細(xì)胞、Tc17細(xì)胞和γδT17數(shù)量，分析患者臨床資料與這些細(xì)胞的相關(guān)性，分別采用ELISA法和Real-Time PCR測(cè)定血清中IL-17、IL-1β、IL-23和TGF-β1濃度和PBMC中上述細(xì)胞因子mRNA表達(dá)情況，并比較手術(shù)前后Th17細(xì)胞、Tc17細(xì)胞和γδT17數(shù)量和相關(guān)細(xì)胞因子水平的變化。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn):肺癌患者外周血中Th17細(xì)胞數(shù)量和γδT17細(xì)胞數(shù)量較健康對(duì)照明顯增高，而Tc17細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組明顯減少;

9、這些細(xì)胞與肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。并且，在外周血中，Th17細(xì)胞是分泌IL-17A的最主要細(xì)胞，Tc17細(xì)胞次之，而γδT17細(xì)胞分泌最少;同時(shí)，肺癌患者血清中IL-17A、IL-23、IL-1β和TGF-β1濃度和相對(duì)應(yīng)的mRNA表達(dá)水平均高于健康對(duì)照，IL-17A水平與Th17細(xì)胞、γδT17細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)。肺癌患者通過手術(shù)切除減輕腫瘤負(fù)荷可以降低Th17細(xì)胞和γδT17細(xì)胞數(shù)量，升高Tc17細(xì)胞數(shù)量，相應(yīng)地，IL-17A和相關(guān)