Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子在HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf

1、目的:乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)相關(guān)慢加急性肝衰竭(acute-on-chronicliverfailure，ACLF)是在慢性肝病基礎(chǔ)上出現(xiàn)的急性的肝臟損害，導(dǎo)致肝臟合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償，出現(xiàn)以凝血機(jī)制障礙和黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床綜合征。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要受病毒和宿主兩方面因素及其相互作用的影響，其中病毒復(fù)制是重癥化發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵，而宿主的免疫損傷機(jī)制是

2、重癥化的核心環(huán)節(jié)。效應(yīng)CD4+T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫應(yīng)答中的重要部分，在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。既往研究證實(shí)，Th1/Th2失衡導(dǎo)致的免疫功能紊亂可能是HBV相關(guān)性ACLF的重要原因;近期研究發(fā)現(xiàn)，CD4+T淋巴細(xì)胞家族新成員—輔助性T細(xì)胞17(Th17)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)也參與了乙型肝炎重癥化過(guò)程。本研究通過(guò)動(dòng)態(tài)觀察HBV相關(guān)ACLF患者外周血Treg、Th17細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子(Foxp3、RORγt)和白細(xì)胞介素-21(IL

3、-21)血清IL-23的水平及變化規(guī)律，旨在探討Treg/Th17的平衡狀態(tài)與HBV相關(guān)ACLF的發(fā)病及臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　 方法:研究對(duì)象為河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院、石家莊市五院門(mén)診及住院患者，包括HBV相關(guān)ACLF組45例，慢性乙型肝炎輕中度組（CHB-m）28例，重度組(CHB-s)22例，乙肝肝硬化代償組(LC-c)10例，失代償期組(LC-d)20例，健康體檢者14例，作為正常對(duì)照組(HC)。檢測(cè)患者肝功能，腎功能，凝

4、血功能，HBV血清學(xué)標(biāo)志物和HBVDNA載量;應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timequantitativepolymerasechainreaction，RT-PCR)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中Foxp3、RORγt及IL-21mRNA的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清IL-23水平。比較Foxp3、RORγt及IL-21mRNA在各組中的表達(dá)情況，并動(dòng)態(tài)觀察其在ACLF患者中的變化趨勢(shì)，進(jìn)行相關(guān)性分析，探討其與HBV相關(guān)

5、ACLF的發(fā)病及臨床預(yù)后的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1、各組間人口學(xué)及臨床基線(xiàn)情況
　　 患者一般情況見(jiàn)表1，ACLF組患者ALT、TBIL、Crea和INR水平顯著高于其余各組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ACLF組中有25例患者因出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥而死亡，其中肺部真菌感染9例，自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎12例，肝腎綜合征4例，肝性腦病7例。乙肝肝硬化失代償組患者2例因上消化道大出血而死亡。
　　 2、各組

6、患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中Foxp3mRNA的表達(dá)情況
　　 ACLF組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中Foxp3mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.270×10-2±0.018×10-2，顯著高于HC組(v.s0.041×10-2±0.004×10-2)、CHB-m組(v.s0.120×10-2±0.018×10-2)、CHB-s組(v.s0.182×10-2±0.025×10-2)、LC-c組(v.s0.138×10-2±0.018×10-2)和L

7、C-d組(0.178×10-2±0.027×10-2)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩兩比較結(jié)果顯示，除LC-d和CHB-s組外(P=0.569)，其余組組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、各組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中RORγtmRNA的表達(dá)情況
　　 ACLF組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中RORγtmRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.299×10-2±0.033×10-2，顯著高于HC組(v.s0.031×

8、10-2±0.005×10-2)、CHB-m組(v.s0.079×10-2±0.020×10-2)、CHB-s組(v.s0.139×10-2±0.023×10-2)、LC-c組(v.s0.093×10-2±0.011×10-2)以及LC-d組(v.s0.146×10-2±0.013×10-2)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩兩比較結(jié)果顯示，除LC-d和CHB-s組外(P=0.412)，其余組組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

9、05)。
　　 4、各組患者外周血單核細(xì)胞RORγt/Foxp3mRNA比值變化
　　 RORγt/Foxp3mRNA水平在HBV相關(guān)慢性肝病中隨病情加重呈現(xiàn)逐漸上升趨勢(shì)，在ACLF組達(dá)到最高1.105±0.055，與其余各組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在肝硬化患者中，LC-d組患者RORγt/Foxp3mRNA水平明顯高于LC-c組(0.827±0.062v.s0.677±0.024)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

10、P＜0.05）。
　　 5、各組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-21mRNA的表達(dá)情況
　　 在HC組、CHB-m組、CHB-s組和ACLF組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中IL-21mRNA水平隨病情加重呈逐漸升高趨勢(shì)，并在ACLF組達(dá)到最高水平(0.326×10-2±0.060×10-2)，兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6、各組患者血清IL-23水平
　　 血清IL-23水平在HC組（12.

11、32±1.81pg/ml）、CHB-m組(16.35±3.24pg/ml)、CHB-s組（23.43±3.5pg/ml）及ACLF組(38.93±2.4pg/ml)隨病情加重，呈逐漸升高趨勢(shì)，兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 7、ACLF組患者Foxp3、RORγtmRNA與MELD評(píng)分及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性分析
　　 ACLF組患者Foxp3mRNA水平與PTA(r=-0.373，P=0.012)呈負(fù)相

12、關(guān)，與TBil(r=0.303，P=0.043)、HBVDNA(r=0.297，P=0.047)和MELD評(píng)分(r=0.328，P=0.023)呈正相關(guān)，而與ALT(r=-0.279，P=0.064)無(wú)明顯相關(guān)性;RORγtmRNA水平與PTA(r=-0.474，P=0.001)呈負(fù)相關(guān)，與TBil(r=0.357,P=0.023)、HBVDNA(r=0.352,P=0.018)和MELD評(píng)分（r=0.376，P=0.011）呈正相關(guān)，

13、而與ALT（r=-0.285，P=0.057）無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 8、外周血單核細(xì)胞IL-21mRNA水平與RORγtmRNA、血清IL-23水平、肝功能、MELD評(píng)分和HBVDNA的相關(guān)性分析
　　 ACLF組患者外周血IL-21mRNA水平與RORγt(r=0.745，P=0.000)、IL-23(r=0.635,P=0.001)、PTA(r=-0.326,P=0.029)、TBil(r=0.358,P=0.016

14、)和MELD評(píng)分（r=0.399，P=0.007）有明顯的相關(guān)性，而與ALT(r=-0.231，P=0.126)和HBVDNA(r=0.232，P=0.125)無(wú)明顯相關(guān)性
　　 9、不同預(yù)后ACLF組患者外周血單個(gè)核細(xì)胞RORγt、Foxp3mRNA水平及其比值變化。
　　 共對(duì)28例ACLF患者進(jìn)行RORγt、Foxp3mRNA水平動(dòng)態(tài)檢測(cè)。依據(jù)患者4周的生存情況，分為存活組（12例）和死亡組（16例）。死亡組患者外

15、周血RORγt、Foxp3mRNA基線(xiàn)水平明顯高于存活組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);分別在治療第7、14、21和28天檢測(cè)患者外周血RORγt、Foxp3mRNA水平，死亡組患者RORγt、Foxp3mRNA水平均呈升高趨勢(shì)，且RORγt/Foxp3mRNA比值逐漸增大，而存活組與之相反，同一時(shí)間點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、隨肝臟炎癥程度的加重患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中Foxp3

16、mRNA、RORγtmRNA的表達(dá)逐漸升高，均在ACLF組達(dá)到最高。
　　 2、RORγt/Foxp3比值隨患者肝臟炎癥的加重而逐漸升高，提示Th17/Treg細(xì)胞免疫失衡狀態(tài)在HBV感染重癥化中發(fā)揮作用。
　　 3、ACLF患者外周血單核細(xì)胞IL-21mRNA與血清IL-23水平、RORγtmRNA水平呈正相關(guān)，并與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)，提示Th17細(xì)胞通過(guò)其重要的調(diào)節(jié)因子和效應(yīng)因子IL-21和IL-23可能促進(jìn)了HB