脾虛與皮膚機械屏障功能關系的實驗研究.pdf

1、皮膚是人體最大的器官,完整的皮膚是機體抵御外界物理、化學損傷,生物等抗原物質的侵入、適應外界溫度變化影響、防止水分過度丟失的機械屏障<'[1]>,皮膚機械屏障功能的減弱是多種皮膚疾病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。如異位性皮炎,現(xiàn)認為皮膚的機械屏障異常是其發(fā)病和發(fā)展的重要原因之一<'[2]>。從異位性皮炎的癥狀特點來看與中醫(yī)的四彎風、濕瘡、奶癬、頑濕等脾虛濕盛、濕郁化熱的皮膚病相類似,健脾法是中醫(yī)治療異位性皮炎的重要治法,但至今尚未見到脾虛、健脾方藥與

2、異位性皮炎相關的藥理研究報導,本研究以中醫(yī)臨床的證治規(guī)律為切入點,探討脾虛與皮膚機械屏障功能的關系。 方法： 1.小鼠表皮脂質的抽提及表皮中神經(jīng)酰胺含量測定方法研究抽提動物表皮脂質,采用薄層層析、BIO-RAD GelDoc凝膠成像系統(tǒng)采集圖像、Quantity One軟件分析測定神經(jīng)酰胺含量,并對含量測定方法進行了方法學考察。 2.三種方法致小鼠脾虛對小鼠表皮神經(jīng)酰胺含量的影響分別復制利血平、大黃、勞倦加饑飽

3、失常三種方法致小鼠脾虛模型,測定表皮神經(jīng)酰胺含量,以確定實驗用脾虛模型。 3.皮膚機械屏障功能障礙瘙癢小鼠模型的考察用有機溶劑造成小鼠瘙癢模型,考察造模0天、3天、5天、7天小鼠瘙癢行為及表皮神經(jīng)酰胺含量,以確定造模天數(shù)。 4.參苓白術散對皮膚機械屏障功能障礙瘙癢小鼠的作用復制小鼠瘙癢模型,觀察參苓白術散對小鼠瘙癢行為的影響。 5.脾虛與皮膚機械屏障功能關系研究及參苓白術散對其干預作用分別復制利血平、大黃、勞倦加

4、饑飽失常所致小鼠脾虛模型,并在此基礎上復制小鼠皮膚機械屏障功能障礙瘙癢模型,采取預防性給予參苓白術散水煎液,記錄動物兩小時內瘙癢次數(shù),測定神經(jīng)酰胺含量,測量表皮厚度。 結果： 1.小鼠表皮脂質的抽提及表皮中神經(jīng)酰胺含量測定方法研究方法學考察,得出:神經(jīng)酰胺在0.416～2.08μg范圍內,含量與密度積分值有良好線性關系,相關系數(shù)R=0.9953；同板精密度良好,RSD=1.09﹪；異板精密度良好,RSD=2.10﹪；對照

5、品溶液與供試品溶液在2小時內顯色穩(wěn)定；重現(xiàn)性良好,RSD=3.03﹪；平均加樣回收率為99.58﹪,RSD=1.46﹪；樣品測定結果RSD=3.10﹪。 2.三種方法致小鼠脾虛對小鼠表皮神經(jīng)酰胺含量的影響三種脾虛模型造模成功。模型組動物表皮神經(jīng)酰胺含量較空白組均下降。其中,利血平組與空白組比較,p<0.001；勞倦組與空白組比較,P<0<0.05.大黃組與空白組比較,P=0.0606(接近0.05)。 3.皮膚機械屏障功

6、能障礙瘙癢小鼠模型的考察造模5天動物與空白組動物比較,瘙癢行為最為明顯,P<0.001；表皮神經(jīng)酰胺含量降低最為明顯,P<0.001。 4.參苓白術散對皮膚機械屏障功能障礙瘙癢小鼠的作用瘙癢次數(shù)和表皮神經(jīng)酰胺含量,給藥組與瘙癢組比較,均無統(tǒng)計學意義。 5.脾虛與皮膚機械屏障功能關系研究及參苓白術散對其干預作用(1)瘙癢行為脾虛瘙癢組動物瘙癢次數(shù)少于單純瘙癢組動物.各給藥組動物瘙癢次數(shù)均值小于相應脾虛組動物瘙癢次數(shù)均值。

7、 (2)神經(jīng)酰胺含量①利血平所致脾虛,各組均值:空白組>瘙癢組>給藥組>利血平組,瘙癢組與空白組、利血平組與瘙癢組、給藥組與利血平組比較,P<0.001；②大黃所致脾虛,各組均值：空白組>瘙癢組>給藥組>大黃組,瘙癢組與空白組比較,P<0.001,大黃組與瘙癢組、給藥組與大黃組比較,P<0.05:⑧勞倦所致脾虛,各組均值：空白組>瘙癢組>給藥組>勞倦組,瘙癢組與空白組比較,P<0.001,勞倦組與瘙癢組、給藥組與勞倦組比較,P<0

8、.05。 (3)表皮厚度復制皮膚機械屏障功能障礙瘙癢模型后,表皮增厚,瘙癢組與空白組比較,P<0.001.利血平和大黃所致的脾虛能夠加劇此種表皮增厚,兩脾虛組與瘙癢組比較,均P<0.001,參苓白術散可明顯抑制此種表皮增厚,給藥組動物表皮厚度明顯低于相應脾虛組,P<0.001。勞倦組動物表皮厚度小于瘙癢組,兩組間差異無統(tǒng)計學意義,給藥組與勞倦組間差異無統(tǒng)計學意義。 結論： 1.抽提動物表皮脂質、薄層層析、BIO-

9、RAD GelDoc 凝膠成像系統(tǒng)采集圖像及Quantity One軟件分析的方法,可用于神經(jīng)酰胺的含量測定。 2.三種脾虛模型均可作為實驗用模型。 3.皮膚機械屏障功能障礙瘙癢小鼠模型的造模天數(shù)5天為宜。 4.參苓白術散對單純瘙癢動物的瘙癢次數(shù)和表皮神經(jīng)酰胺含量的影響無統(tǒng)計學意義。 5.皮膚機械屏障功能障礙時表皮神經(jīng)酰胺含量降低,脾虛會加重神經(jīng)酰胺含量的降低,健脾方藥參苓白術散可以減輕脾虛小鼠瘙癢程度