中藥甘草提取物對UVB損傷皮膚屏障功能的防護作用及機制研究.pdf

1、目的：研究外用甘草乳膏對UVB輻射引起的BALB/C小鼠皮膚光損傷的干預作用及對皮膚角蛋白17（CK-17）、轉(zhuǎn)谷酰胺酶（TGase）的基因和蛋白表達水平影響，探討甘草乳膏對UVB輻射BALB/C小鼠皮膚屏障損傷的防御作用及對皮膚角蛋白17（CK-17）、轉(zhuǎn)谷酰胺酶（TGase）基因和蛋白表達水平的影響，探討甘草乳膏對UVB輻射BALB/C小鼠皮膚屏障的保護作用及可能機制，為驗證甘草乳膏防護陽毒外襲的有效性及將甘草開發(fā)成防護紫外線外用制

2、劑奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：將BALB/C小鼠隨機分為4組：空白對照組（K）、模型組(M)、基質(zhì)乳膏組(J)、及甘草乳膏組(H)，實驗前將背毛剃凈并在剃毛處皮膚給予相應(yīng)處理（J組涂抹基質(zhì)乳膏，H組涂抹5％甘草乳膏，K組及M組不給藥）20分鐘后除空白對照組，其余各組分別給予500mJ/cm2的UVB輻射，1次/日，連續(xù)30天，肉眼觀察各組小鼠皮膚一般形態(tài)改變，并拍照及文字描述雙重記錄；之后，頸椎脫臼處死實驗小鼠，手術(shù)切取照射部位皮膚

3、組織分為三部分：①HE染色法觀察皮膚組織形態(tài)學改變，②用qRT-PCR法檢測小鼠皮膚組織中的角蛋白17（CK-17）、轉(zhuǎn)谷酰胺酶（TGase）mRNA的相應(yīng)表達水平，③westernblot法檢測上述指標蛋白表達。
　　結(jié)果：
　　1.一般形態(tài)學：與空白對照組后剃毛區(qū)皮膚相比較，基質(zhì)軟膏組小鼠與模型組照射部位皮膚色澤變暗伴脫屑，光澤度及彈性變差，增粗橫紋褶皺樣改變，甚至出現(xiàn)糜爛面；甘草組小鼠在實驗部位邊緣可見少量脫屑。

4、>　　2.組織學改變：HE染色切片示甘草組較空白對照組，角質(zhì)層輕微增厚，有少量炎性細胞；基質(zhì)組及模型組分別與空白對照組相比：皮表結(jié)構(gòu)完整性欠佳，角質(zhì)層厚度增加且各細胞層分界不清，真皮層纖維分布不均勻、可見斷裂，皮脂腺無規(guī)則增生、附屬器內(nèi)可見大量炎性細胞的浸潤。
　　3.RTFQ-PCR法示UVB輻射后模型組、基質(zhì)組的CK-17 mRNA表達水平比空白對照組顯著升高（P＜0.01）,甘草組與空白組相比略有升高，（P＜0.05），基質(zhì)

5、組與模型組差異不明顯（p＞0.05），甘草組與模型組相比CK-17表達明顯降低（P＜0.01），輻射后模型、基質(zhì)、甘草組TGase mRNA表達水平比空白對照組顯著升高（P＜0.01）,基質(zhì)組與模型組相比差異不明顯（p＞0.05），而甘草組與模型組相比TGase表達有所降低（P＜0.05）。
　　4.westernblot法示UVB輻射后模型組、基質(zhì)組的CK-17的蛋白表達水平較空白對照組顯著升高（P＜0.01）,甘草組比空白組略

6、升高（P＜0.05），基質(zhì)組較模型組相比差異不明顯（p＞0.05），而甘草組與模型組相比，CK-17表達明顯降低（P＜0.01），輻射后模型組、基質(zhì)組、甘草組TGase的蛋白表達水平較空白對照組顯著升高（P＜0.01）,基質(zhì)組與模型組相比差異不明顯（p＞0.05），而甘草組與模型組相比，TGase表達有所降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.UVB輻射對BALB/C小鼠皮膚屏障具有著顯著的損傷作用：能誘導皮膚組織CK-