密度蛋白、β-鏈蛋白在原發(fā)性膜性腎病腎小球內(nèi)的表達變化及意義.pdf

1、目的：隨著對慢性腎臟病的深入研究，已發(fā)現(xiàn)腎小球臟層上皮細胞即足細胞的裂孔隔膜結構和功能與腎小球濾過屏障有關、足細胞和裂孔隔膜相關蛋白的變化與足細胞裂孔隔膜的形態(tài)、功能和蛋白尿的發(fā)生密切相關。因此，裂孔隔膜蛋白變化與腎臟疾病關系的研究一直為人們所關注。 密度蛋白(densin)和β-鏈蛋白(beta-catenin)是近年來發(fā)現(xiàn)的足細胞蛋白，被認為與腎小球足細胞和裂孔隔膜的形態(tài)與功能有關。密度蛋白作為O-唾液酸蛋白家族的跨膜蛋白，

2、最早由老鼠的前腦突觸后密度區(qū)提取，屬于富含亮氨酸重復序列和PSD-95/DIg-A/ZO(PDZ)區(qū)所組成的LAP蛋白家族。β-鏈蛋白被認為是密度蛋白的伴侶蛋白，與密度蛋白的功能不可分割。密度蛋白和β-鏈蛋白分布于腎小球足細胞和足細胞連接部位，是腎小球足細胞裂孔膜的重要組成部分。密度蛋白與F-肌動蛋白關系密切，密度蛋白可能以不同的方式與足細胞細胞骨架連接，密度蛋白與β-鏈蛋白的相互作用提供了一種通過α-鏈蛋白(alpha-catenin

3、)與細胞骨架的連接。已知α-鏈蛋白與β-鏈蛋白和F-肌動蛋白相互作用，并因此把鏈蛋白/鈣粘蛋白復合物(catenin/cadherin complex)連到細胞骨架。密度蛋白可能與黏附連接蛋白β-鏈蛋白可能共同發(fā)揮作用把鈣粘蛋白、鏈蛋白和nephrin復合物連接到肌動蛋白(actin)細胞骨架與信號轉導通路。密度蛋白和β-鏈蛋白與足細胞病之一的原發(fā)性膜性腎病(IMN)的關系尚未探討。本研究旨在利用免疫組化的方法了解密度蛋白(densin

4、)和β-鏈蛋白(beta-catenin)在原發(fā)性膜性腎病患者腎小球內(nèi)的表達變化及其與蛋白尿，血肌酐等指標的關系，探討密度蛋白和β-鏈蛋白對IMN患者的影響。 方法：病例來源于2007年1月至2007年12月期間在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院腎內(nèi)科病房診治的31例原發(fā)性膜性腎病患者。對照者來自同期河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院泌尿外科病房診治5例已行一側腫瘤腎切除后證實為良性腎臟腫瘤腎的患者。應用免疫組織化學技術(PV法)，分別檢測25例Ⅰ期IM

5、N患者(Ⅰ期IMN組)、5例Ⅱ期及1例Ⅲ期IMN患者(Ⅱ+Ⅲ期IMN組)和5例因腎腫瘤行一側腫瘤腎切除后被證實為腎良性腫瘤的患者(對照組)腎小球內(nèi)密度蛋白和β-鏈蛋白的表達變化并與各組受試者尿蛋白等指標水平進行直線相關性分析。一抗為兔抗人β-鏈蛋白多克隆抗體和鼠抗人密度蛋白多克隆抗體。 結果：1臨床實驗指標：31例特發(fā)性膜性腎病組患者，平均年齡(50.74±10.64)與正常對照組，平均年齡(55.60±10.12)比較，在年齡

6、構成上無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；正常對照組的的24小時尿蛋白定量、血肌酐分別為：(0.05±0.03g/24h)、(63.74±8.95μmol/L)；Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組、Ⅰ-Ⅲ期IMN組24小時尿蛋白定量分別為：(4.51±2.23 g/24h)、(4.78±2.16g/24h)、(4.56±2.26 g/24h)；Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組、Ⅰ-Ⅲ期IMN組血肌酐分別為：(72.02±11.87μmol/L)、(

7、76.30±6.50μmol/L)、(72.85±11.08μmaol/L)。2 免疫組織化學結果：2.1 密度蛋白在對照組正常腎組織的腎小球足細胞和IMN患者腎小球足細胞均有表達。在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組及對照組腎小球的密度蛋白表達的陽性面積率值分別為：(30.69±11.96)、(34.46±9.95)、(14.98±3.93)、(49.56±4.89)。密度蛋白在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的

8、表達均較對照組顯著減弱(分別為P<0.01，P<0.05，P<0.001)；密度蛋白在Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的表達較Ⅰ期IMN組顯著減弱(P<0.001)。2.2 β-鏈蛋白在對照組正常腎組織的腎小球足細胞、內(nèi)皮細胞、系膜細胞及腎小管上皮細胞和IMN患者腎小球足細胞、內(nèi)皮細胞、系膜細胞及腎小管上皮細胞均表達。在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組及對照組腎小球的密度蛋白表達的陽性面積率值分別為：(35.49±11.75)、(39.

9、66±8.75)、(18.10±3.30)、(59.16±4.34)。β-鏈蛋白在IMN組、Ⅰ期IMN組、Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的表達均較對照組顯著減弱(P均<0.001)；β-鏈蛋白在Ⅱ+Ⅲ期IMN組腎小球內(nèi)的表達較Ⅰ期IMN組顯著減弱(P<0.001)。2.3 IMN組腎小球內(nèi)密度蛋白的表達與β-鏈蛋白的表達呈正相關關系(r=0.718，P=0.001)。2.4 IMN組腎小球內(nèi)密度蛋白的表達與24小時尿蛋白定量呈負相關關系(r=

10、-0.581，P=0.001)，而與血白蛋白、血肌酐、血脂、免疫球蛋白及血尿酸無明顯相關性。IMN組腎組織內(nèi)β-鏈蛋白的表達與24小時尿蛋白定量呈負相關關系(r=-0.550，P=0.001)，與血白蛋白、血肌酐、免疫球蛋白IgG及血尿酸無明顯相關性。2.5 IMN組24小時尿蛋白定量明顯高于對照組(P<0.01)。 結論：1.腎小球內(nèi)密度蛋白特異性地表達于足細胞。密度蛋白在IMN組的表達較正常對照組組顯著減弱，且密度蛋白在IM