鮑魚養(yǎng)殖水系中霍亂弧菌基因水平轉(zhuǎn)移的初步研究.pdf

1、霍亂毒素基因(choleratoxin gene,ctxAB)可以通過溶源性絲狀噬菌體(CTX φ)發(fā)生水平轉(zhuǎn)移,因此,基因水平轉(zhuǎn)移在霍亂弧菌(Vibrio cholerae,VC)的進(jìn)化中有著舉足輕重的作用.隨著致病性VC也是水系中常在菌觀念的確立,環(huán)境因素對ctxAB基因轉(zhuǎn)移的影響成為人們研究的熱點.故該研究在初步調(diào)查致病性VC攜帶溶源性噬菌體的基礎(chǔ)上,建立了追蹤致病基因的原位PCR-流式細(xì)胞儀(in situ PCR-flowcy

2、tometry,ISPCR-FCM)分析法.并在鮑魚養(yǎng)殖水系中,運用該方法進(jìn)行了VC基因水平轉(zhuǎn)移的初步研究.以絲裂霉素C為誘導(dǎo)劑,調(diào)查了VC攜帶溶源性噬菌體的情況.結(jié)果表明在絲裂霉素C誘導(dǎo)作用下,約18.75％(3/16)菌株產(chǎn)生攜帶ctxAB基因的絲狀噬菌體CTXφ;一株O139群霍亂弧菌分泌出一種單條型絲狀噬菌體,其性質(zhì)不詳;未檢測出可以轉(zhuǎn)移毒素共協(xié)調(diào)菌毛(toxin-coregulated pilus,TCP)的溶源性絲狀噬菌體(

3、Vibrio cholerae pathogenicityisland phage,VIP φ).VC經(jīng)固定和溶菌酶消化處理后,根據(jù)常規(guī)PCR確定的擴增參數(shù)進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)ctxAB基因的原位擴增.FCM分析顯示陽性率達(dá)100%.裂解細(xì)菌,獲取擴增產(chǎn)物,瓊脂糖凝膠電泳檢測和測序的結(jié)果表明擴增產(chǎn)物是ctxAB基因的序列.多次重復(fù)試驗結(jié)果一致.該方法的靈敏性達(dá)104個/ml.至此,建立了原位檢測細(xì)菌內(nèi)特異基因的ISPCR-FCM分析法.以鮑魚養(yǎng)殖