霍亂弧菌DsbC蛋白功能的研究.pdf

1、霍亂弧菌屬于革蘭氏陰性菌，能游動，兼性厭氧彎曲桿菌，人類傳染病霍亂的致病微生物，可引起急性腸道感染，水樣腹瀉（1-6升/小時）和嘔吐，導致嚴重脫水和死亡，在衛(wèi)生條件較差的地區(qū)如重災區(qū)易爆發(fā)。研究發(fā)現(xiàn)，當霍亂弧菌進入人體內(nèi)定殖于小腸，經(jīng)腸道內(nèi)膽汁酸分子的刺激，使TcpP單體形成二聚體，激活毒素調(diào)控基因toxT的表達，進而產(chǎn)生霍亂毒素。而TcpP周質空間二硫鍵的形成對于自身二聚體的形成十分關鍵。無論真核生物還是原核生物，分泌蛋白正確二硫鍵的

2、形成對于蛋白功能具有關鍵影響，而二硫鍵異構酶介導產(chǎn)生正確二硫鍵。在革蘭氏陰性菌的周質空間的二硫鍵氧化還原酶類（Dsb家族），決定底物蛋白二硫鍵的形成。
　　本研究旨在探索霍亂弧菌VcDsbC蛋白的功能以及膽鹽對VcDsbC功能的影響。大腸桿菌DsbC蛋白目前研究十分清楚，本研究以EcDsbC作為對照，探究VcDsbC功能。本研究進行了VcDsbC以及EcDsbC蛋白的表達與純化，并制備了VcDsbC多克隆抗體;通過等溫滴定量熱技術

3、，發(fā)現(xiàn)?；悄懰?TC)與VcDsbC或EcDsbC之間存在互作;VcDsbC具有較高的還原酶活性，而?；悄懰?TC)不影響其還原酶活性;利用霍亂弧菌體內(nèi)異構酶功能檢測方法，證實VcDsbC具有異構酶功能;本研究以錯搭水蛭素為底物，建立了體外異構酶功能的檢測方法并且發(fā)現(xiàn)膽鹽抑制了EcDsbC的異構酶活性。
　　綜上所述，本研究證明霍亂弧菌DsbC蛋白具有較高還原酶活性以及異構酶功能，構建β內(nèi)酰胺酶系統(tǒng)檢測VcDsbC體內(nèi)異構酶功能，