類癌和睪丸腫瘤組織中血管生成擬態(tài)的分布和相關(guān)分子機(jī)制初步探討.pdf

1、目的： 研究類癌(Carcinoidtumout)和睪丸腫瘤(Testiculartumours)組織中是否存在血管生成擬態(tài)(VasculogenicMimicry，VM)及相關(guān)臨床意義，通過觀察基質(zhì)金屬蛋白酶2、7、9(Matrixmetalloproteinase2、7、9，MMP2、MMP7、MMP9)、組織蛋白酶D(CathepsinD，CathD)、整合素β2(Integrinβ2)、黏著斑激酶(FocalAdhesi

2、onKinase，F(xiàn)AK)及血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)在類癌和睪丸腫瘤組織中的表達(dá)，探討VM發(fā)生相關(guān)分子機(jī)制。 方法： 1.觀察類癌和睪丸腫瘤中VM的分布及臨床病理意義收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1992年1月1日～2002年12月20日類癌標(biāo)本52例和睪丸腫瘤標(biāo)本40例，患者發(fā)病年齡、性別、腫瘤部位、大小及轉(zhuǎn)移等隨訪資料完整，通過CD34和PAS雙重

3、染色觀察VM結(jié)構(gòu)并分析VM的分布和臨床病理意義。 2.分析FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2、MMP7、MMP9、和VEGF在類癌和睪丸腫瘤中與VM的關(guān)系構(gòu)建組織芯片，利用血管生成擬態(tài)密度(Vasculogenicmimicrydensity，VMD)、微血管密度(Microvesseldensity，MVD)計(jì)數(shù)和免疫組織化學(xué)方法分析類癌和睪丸腫瘤中FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2、MMP7、

4、MMP9和VEGF表達(dá)陽性組和陰性組之間VMD和MVD的差別，VM陽性組和陰性組之間蛋白表達(dá)的差別以及表達(dá)蛋白之間的相關(guān)性。 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-timePCR，RT-PCR)檢測類癌和睪丸腫瘤中相關(guān)基因mRNA的表達(dá)，分析它們與VM的關(guān)系收集天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院組織庫2005年至今新鮮凍存標(biāo)本類癌組織35例，睪丸腫瘤組織27例，通過閱HE及CD34和PAS雙重染色切片后分析VM的分布，利用RT-PCR檢測目的

5、基因FAK、CathD、Integrinβ2、MMP2、MMP7、MMP9和VEGFmRNA的表達(dá)，從mRNA的水平分析其對VM形成和腫瘤侵襲能力的影響。 結(jié)果： 1.類癌和睪丸腫瘤中VM的分布和臨床病理意義通過CD34和PAS雙重染色證實(shí)在類癌和睪丸腫瘤組織中存在VM結(jié)構(gòu)。VM陽性較VM陰性患者生存情況差(類癌：P=0.0017，睪丸腫瘤：P=0.0127)；COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析結(jié)果顯示：VM是類癌和睪丸腫瘤患者生存

6、的獨(dú)立預(yù)后因素(類癌：危險(xiǎn)比[Riskratio，rr]=3.190，睪丸腫瘤：rr=4.043)。 2.FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2、MMP7、MMP9和VEGF免疫組化染色結(jié)果及VMD、MVD計(jì)數(shù)差異在類癌組織中，VM陽性組FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2表達(dá)高于VM陰性組，VEGF表達(dá)低于VM陰性組(均P<0.05)；FAK、Integrinβ2、CathD、MMP2表達(dá)陽性組的VM

7、D高于表達(dá)陰性組，VEGF表達(dá)陽性組的VMD低于陰性組(均P<0.05)；CathD、MMP2、VEGF表達(dá)陽性組MVD高于表達(dá)陰性組(均P<0.05)：FAK和Integrinβ2、CathD和MMP2的表達(dá)呈正相關(guān)。 在睪丸腫瘤中，VM陽性組FAK、CathD、MMP2、MMP7表達(dá)高于VM陰性組(均P<0.05)；FAK、CathD、MMP2、MMP7表達(dá)陽性組的VMD高于陰性組(均P<0.05)；FAK、CathD、MM

8、P2、MMP7、VEGF表達(dá)陽性組MVD高于陰性組(均P<0.05)；FAK和CathD，CathD和MMP2、MMP7的表達(dá)呈正相關(guān)。 3.RT-PCR檢測類癌和睪丸腫瘤中相關(guān)基因mRNA的表達(dá)RT—PCR結(jié)果顯示類癌組織中，VM陽性組FAK、Integrinβ2、CathD和MMP2mRNA表達(dá)均高于VM陰性組，VEGFmRNA表達(dá)低于VM陰性組(均P<0.05)；睪丸腫瘤中，VM陽性組FAK、CathD、MMP2和MMP7

9、mRNA的表達(dá)均高于VM陰性組(均P<0.05)，與免疫組化結(jié)果趨勢一致。 結(jié)論： 1.類癌和睪丸腫瘤中均存在VM。VM是腫瘤細(xì)胞為適應(yīng)環(huán)境而產(chǎn)生的一種獨(dú)特的血液供應(yīng)模式，與內(nèi)皮依賴性血管并存于腫瘤組織內(nèi)。存在VM的患者易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，預(yù)后差。VM是評價(jià)患者預(yù)后重要的獨(dú)立因素。 2.在類癌組織中，F(xiàn)AK、Integrinβ2、CathD、MMP2可能參與了VM結(jié)構(gòu)的形成，而FAK、Integfinβ2、CathD