液相微萃取對微量苯丙酸類中藥有效成分的濃縮、富集及色譜分析.pdf

1、本文對微量苯丙酸類中藥有效成分的濃縮、富集及色譜分析進(jìn)行了研究。文章分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：時(shí)間分辨-液相微萃取-高效液相色譜法測定大鼠血漿、尿液中綠原酸及3種代謝產(chǎn)物的濃度。
　　 目的：建立時(shí)間分辨-二元溶劑協(xié)同液相微萃取-高效液相色譜法測定生物樣品中綠原酸及其3種代謝產(chǎn)物咖啡酸、對羥基桂皮酸、阿魏酸的濃度，初步揭示綠原酸及其3種代謝物在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化過程；闡明時(shí)間分辨-液相微萃取機(jī)理；討論生物樣品基質(zhì)及萃取

2、過程乳化現(xiàn)象對液相微萃取效率的影響。
　　 方法：以聚偏氟乙烯纖維為溶劑載體，正戊醇：正庚醇(7∶3,v/v)為二元萃取溶劑，pH2.1-2.4的HCl生物樣品為供相，pH12的NaOH溶液為接收相，在1200rpm轉(zhuǎn)速下，血漿萃取40min、尿液萃取20min，HPLC測定3種代謝產(chǎn)物；血漿萃取180min、尿液萃取60min，HPLC測定綠原酸。優(yōu)化的色譜條件：C18柱，流動(dòng)相為甲醇：0.2％磷酸，梯度洗脫，(0→6min，

3、22％∶78％→28％∶72％，v/v)，流速1.0mL·min-1，柱溫37℃，檢測波長320nm。
　　 結(jié)果：血漿中綠原酸的線性范圍：1.0×10-3-13.5μg·mL-1，檢測限：0.1ng·mL-1；咖啡酸的線性范圍：2.0×10-3-10.8μg·mL-1，檢測限：0.8ng·mL-1；阿魏酸的線性范圍：8.0×10-3-13.5μg·mL-1，檢測限：5.0ng·mL-1；對羥基桂皮酸的線性范圍：2.5×10-3

4、-5.5μg·mL-1，檢測限：2.0ng·mL-1，相關(guān)系數(shù)均大于0.99。日內(nèi)精密度RSD＜5.0％；日間精密度RSD＜8.4％。血漿中綠原酸及其3種代謝產(chǎn)物平均回收率在90.8％-119.8％之間。尿液供相中綠原酸的線性范圍：0.5×10-2-13.5μg·mL-1，檢測限：1.0ng·mL-1；咖啡酸的線性范圍：10.0×10-2-13.5μg·mL-1，檢測限：50.0ng·mL-1；阿魏酸的線性范圍：50.0×10-2-10

5、.8μg·mL-1，檢測限：50.0ng·mL-1；對羥基桂皮酸的線性范圍：2.5×10-2-6.8μg·mL-1，檢測限：10.0ng·mL-1，相關(guān)系數(shù)均大于0.97。日內(nèi)精密度RSD＜6.3％。尿液中咖啡酸、對羥基桂皮酸平均回收率在81.6％-111.6％之間。血漿尿液中代謝物檢測結(jié)果表明，綠原酸口服給藥后，只有少部分在小腸以原型吸收，大部分則進(jìn)入結(jié)腸經(jīng)腸內(nèi)細(xì)菌菌叢作用，水解生成主要代謝產(chǎn)物咖啡酸，咖啡酸被吸收進(jìn)入血液，進(jìn)行肝腸循

6、環(huán)。咖啡酸在肝臟中O-甲基轉(zhuǎn)移酶催化下發(fā)生甲基結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)生阿魏酸。在肝臟微粒體代謝作用中阿魏酸在細(xì)胞色素P450酶參與下發(fā)生氧化反應(yīng)去烷醚基轉(zhuǎn)化為對羥基桂皮酸，最終通過腎臟以代謝產(chǎn)物的形式隨尿排出。
　　 結(jié)論：時(shí)間分辨-液相微萃取測定生物樣品中綠原酸及其3種代謝產(chǎn)物的濃度，不僅延長了生物樣品中測定綠原酸的線性范圍，提高了測定的靈敏度，又有效的去除生物樣品中復(fù)雜基質(zhì)的干擾，降低了檢測限。
　　 第二部分：液相微萃取對中藥

7、中低豐度有效成分桂皮酸及其衍生物的濃縮、富集及色譜分析。
　　 目的：利用液相微萃取/后萃取對中藥制劑桂枝茯苓丸及藥材白附子中低豐度有效成分桂皮酸、對羥基桂皮酸和對甲氧基桂皮酸的濃縮、富集進(jìn)行了研究，并與高效液相色譜法結(jié)合對桂皮酸及其衍生物進(jìn)行了定性鑒別及含量測定。給出了欲萃物濃度、供相體積與富集倍數(shù)之間的關(guān)系。
　　 方法：優(yōu)化分析物的微萃取條件，以聚偏氟乙烯中空纖維為溶劑載體，正庚醇為萃取溶劑，2.0×10-4mol

8、·L-1的HCl水溶液作為供相，接收相為0.008mol·L-1的NaOH溶液，在1800rpm轉(zhuǎn)速下，萃取60min，萃取完成之后進(jìn)行HPLC分析。色譜條件選擇Agilent C18柱(5μm,150mm×4.6mm)，檢測波長：290nm，流速：1.0mL·min-1，柱溫28℃，進(jìn)樣量20μL，流動(dòng)相：甲醇：0.2％磷酸，梯度洗脫(0→5min，40％∶60％→42％∶58％，v/v)。
　　 結(jié)果：桂皮酸、對羥基桂皮酸、

9、對甲氧基桂皮酸的線性范圍可達(dá)6個(gè)數(shù)量級，線性范圍分別為2.0×10-6-2.0μg·mL-1，2.0×10-7-2.0μg·mL-1，2.0×10-6-2.0μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)均大于0.998，檢測限分別為0.2，0.08，0.2pg·mL-1。日內(nèi)精密度RSD＜10.6％，日間精密度RSD＜11.9％，桂枝茯苓丸和白附子中分析物的加樣回收率分別為94.7％-101.3％和92.1％-105.9％之間。
　　 結(jié)論：該方法