加味丹參飲對血瘀證兔心肌IRI保護作用及NF-κB細胞信號轉(zhuǎn)導調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的：
　　 1.研究加味丹參飲對血瘀證家兔心肌IRI保護作用機制。
　　 2.研究加味丹參飲對血瘀證家兔IRI心肌NF-κB細胞信號轉(zhuǎn)導調(diào)控作用。
　　 方法：
　　 1.兔耳緣靜脈緩慢注射去甲腎上腺素方法，建立血瘀證動物模型，血瘀證家兔結(jié)扎/松開左冠狀動脈前降支的方法造成心肌缺血再灌注損傷模型。家兔隨機分組為：空白組（A）、血瘀證組（B）、IRI 組（C）、預處理組（D）、丹參組（E）和加味丹參飲組（

2、F）。實驗中觀察家兔心電圖動態(tài)變化，實驗結(jié)束后，取血測定CK-MB、LDH、血流變學；摘取缺血心肌，采用電鏡觀察心肌細胞超微結(jié)構(gòu)；采用末段探針標記（TUNEL）法檢測心肌凋亡細胞。
　　 2.造模與分組方法同上，實驗結(jié)束后，取血用放射免疫法測定ET-1、TXB2和6－酮－PGF1a ；摘取冠狀動脈采用電鏡觀察冠狀動脈內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)，摘取缺血心肌分別用RT-PCR法和免疫組化法觀察基因eNOS蛋白表達和mRNA表達。
　　

3、 3.造模與分組方法同上，實驗結(jié)束后，取血用放射免疫法測定TNF-a和IL-2水平；摘取缺血心肌用免疫組化法觀察基因NF-κB蛋白表達和基因ICAM- 1的蛋白表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.對心肌缺血再灌注損傷血瘀證家兔心肌細胞保護作用心電圖ST段觀察結(jié)果顯示IRI 組結(jié)扎后15min到30min 過程ST段在明顯抬高呈現(xiàn)上升趨勢，與A，B組比較差異顯著（p<0.01）；與缺血再灌注C組比較,D，E和F組在結(jié)扎后及再

4、灌注后各時間段ST段明顯下降（p<0.05 或p<0.01）。心肌酶水平觀察結(jié)果顯示，C組LDH和CK-MB均高于A組和B組，差別顯著（P﹤0.01）；E和F組LDH和CK-MB均較C組明顯降低（P﹤0.05 或P﹤0.01）；血流變學觀察結(jié)果顯示，與血瘀證B組比較，IRI組全血粘度、血漿粘度和紅細胞壓積均升高（P﹤0.05 或P﹤0.01），與IRI組比較，D，E，F(xiàn)組有不同程度的降低上述指標（P﹤0.05或P﹤0.01）。心肌細胞超

5、微結(jié)構(gòu)觀察顯示缺血再灌注過程家兔心肌細胞病理損傷較重，而加味丹參飲可以減輕超微結(jié)構(gòu)損傷而保護心肌。心肌細胞凋亡觀察結(jié)果顯示，與空白組比較，IRI組心肌細胞凋亡增高（P﹤0.01），與IRI組比較，D、E和F組心肌細胞凋亡均降低（P﹤0.01），與D組比較，F(xiàn)組心肌細胞凋亡沒差異。
　　 2.對心肌缺血再灌注損傷血瘀證家兔內(nèi)皮細胞保護作用血漿ET－1測定結(jié)果顯示，心肌IRI后血瘀證家兔ET-1水平明顯升高，而加味丹參飲可明顯降低E

6、T-1因子水平。TXB2和6－酮－PGF1a水平測定結(jié)果顯示，D、E和F組與C組比較, TXB2均顯著降低（p﹤0.01或p﹤0.05），6－酮－PGF1a水平均顯著升高（p﹤0.01），加味丹參飲可降低TXB2水平，升高6－酮－PGF1a水平。內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)觀察顯示缺血再灌使內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)嚴重損傷，而加味丹參飲能保護內(nèi)皮細胞的超微結(jié)構(gòu)，減輕缺血再灌注對內(nèi)皮的損傷。eNOS mRNA和蛋白表達結(jié)果顯示，與血瘀證組比較，IRI組表達明

7、顯降低（p﹤0.05），D、E和F組表達不同程度增高，（p﹤0.01或p﹤0.05）；與IRI組比較，D、E和F組表達均增高（P﹤0.01）。
　　 3.對心肌缺血再灌注損傷血瘀證家兔心肌細胞NF-κB信號轉(zhuǎn)導途徑網(wǎng)絡調(diào)控作用炎癥因子測定結(jié)果顯示，與A組和B組比較，IRI組TNF-a 和IL-2水平均明顯升高，差別顯著（P﹤0.01），D、E和F組可明顯降低TNF-a和IL-2水平，與IRI組比較差異有顯著性（P﹤0.01 或P

8、﹤0.05）；ICAM-1和NF-κB蛋白表達結(jié)果顯示，與空白組比較，IRI組ICAM-1和NF-κB均表達增高（P﹤0.01）；與IRI組比較，D、E和F組ICAM-1 和NF-κB表達均降低差異顯著（P﹤0.01）；與預處理組比較，F(xiàn)組NF-κB表達和ICAM-1表達沒有顯著差異（P﹥0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.加味丹參飲可以抑制心肌IRI血瘀證家兔心電圖ST段上抬，明顯降低心肌酶水平，改善心肌血液循環(huán)，保

9、護缺血心肌超微的結(jié)構(gòu)，抑制心肌細胞凋亡等多環(huán)節(jié)來保護家兔心肌IRI作用。
　　 2.加味丹參飲對心肌缺血再灌注損傷血瘀證家兔內(nèi)皮細胞保護作用與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)和功能有關。
　　 3.加味丹參飲可明顯提高eNOS蛋白和eNOS mRNA 表達水平，且和預處理作用無顯著差別，是該方對心肌IRI家兔內(nèi)皮細胞保護作用一重要分子機制。
　　 4.加味丹參飲對心肌IRI血瘀證兔心肌NF-κB細胞信號傳導途徑具有調(diào)節(jié)作用，這是