加味丹參飲預(yù)處理對(duì)大鼠心肌細(xì)胞延遲保護(hù)作用及細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理研究.pdf

1、目的：觀察加味丹參飲(JDD)預(yù)處理對(duì)大鼠心肌細(xì)胞的延遲保護(hù)作用及其細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)理。 方法：實(shí)驗(yàn)分三部分。第一部分：選用出生72h的大鼠，將培養(yǎng)72h的大鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分6組?？瞻捉M正常培養(yǎng)；空白血清對(duì)照組加50％大鼠血清培養(yǎng)；含藥血清對(duì)照組加含50％JDD的藥物血清培養(yǎng)，缺氧/復(fù)氧(H/R)組予缺氧3h，再給氧1h；缺氧預(yù)處理(HPC)組、加味丹參飲預(yù)處理(JDDPC)組分別給予HPC、JDDPC，24h后再給予缺氧3h，再

2、給氧1h。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，以臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察各組細(xì)胞存活率，以比色法觀察乳酸脫氫酶(LDH)、肌磷酸激酶(CK)的活性。第二部分：將培養(yǎng)72h的大鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分8組，空白組、空白血清對(duì)照組、含藥血清對(duì)照組、H/R組、HPC組、JDDPC組處理同第一部分；HPC+多粘菌素B(PMB)組預(yù)處理前先加入PMB，余處理同HPC組：，JDDPC+PMB組預(yù)處理前先加入PMB，余處理同JDDPC組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，以臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察各組細(xì)胞存活率，以比色法觀

3、察LDH、CK的活性,以PepTag非放射性蛋白激酶試劑盒檢測(cè)蛋白激酶C(PKC)。第三部分：將培養(yǎng)7 2h的大鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分8組，空白組、空白血清對(duì)照組、含藥血清對(duì)照組、H/R組、HPC組、JDDPC組處理同第一部分；HPC+格列本脲(GLI)組預(yù)處理前先加入GLI，余處理同HPC組；JDDPC+GLI組預(yù)處理前先加入GLI，余處理同JDDPC組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束，以臺(tái)盼藍(lán)染色法觀察各組細(xì)胞存活率，以比色法觀察LDH、CK的活性，以Fura

4、-2/aM為指示劑檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，以RT-PCR檢測(cè)熱休克蛋白70mRNA(HSP70mRNA)。 結(jié)果：HPC組、JDDPC組細(xì)胞存活率明顯高于H/R組(P<0.01)，LDH、CK明顯低于H/R組(P<0.01). HPC+PMB組、HPC+GLI組細(xì)胞存活率、LDH及CK的活性與H/R組比較無顯著性差異(P>0.05)。JDDPC+PMB組、JDDPC+GLI組細(xì)胞存活率高于H/R組(P<0.01)，但低于HPC、J

5、DDPC組(P0.05). JDDPC+PMB組PKC活性、JDDPC+

6、GLI組HSP70mRNA表達(dá)高于H/R組(P<0.01或P<0.05)，但低于HPC、JDDPC組(P<0.01)；JDDPC+GLI組細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度低于H/R組(P<0.01)，但高于HPC、JDDPC組(P<0.01)。 結(jié)論：①加味丹參飲預(yù)處理具有延遲保護(hù)作用。②PKC的抑制劑PMB、ATP敏感性鉀通道(K<,ATP>)的抑制劑GLI能完全阻斷HPC的延遲保護(hù)作用，說明PKC是HPC的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路， K<,ATP>為H